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DNA复制错误 凯恩斯的实验结果可得到两个重要的结论 乳糖可诱使Lac +突变种持续产生，而不是因为饥饿所导致； 乳糖诱使细菌产生特定方向的突变，也就是乳糖只会诱使大肠杆菌的LacZ基因产生突变，而不影响其他的基因。 五、基因突变在药物评价中的应用 三、突变体的分离与分析 （一）突变体的分离： 分子生物学研究中，基因突变可以在体外按照人们的设计进行，但是仍然有很多不需要的突变体，因此需要分离，方法有： 利用遗传分析方法，筛选、选择、富集需要的突变体，常见的例子是利用抗性基因，使带有抗性基因的突变体可以生长，其它被杀死。 （二）突变体的分析： 遗传检测法 ⑴ 根据重组载体的抗药性标志筛选： 如抗氨芐青霉素（anpr）、抗四环素(terr)、抗卡那霉素(kanr)等。当培养基中含有抗生素时，只有携带相应抗药性基因载体的细胞才能生存繁殖，这就把凡未能接受载体DNA的细胞全部筛除掉了。 如果外源目的序列是插入在载体的抗药性基因中间使这抗药性基因失活，这个抗药性标志就会消失。 点突变：通常指碱基替代，点突变又可分为：单点突变（point mutation）和多点突变（multiple mutation）。可以分为转换（transitions）和颠换（transversions）两类。转换：嘌呤和嘌呤之间的替换，或嘧啶和嘧啶之间的替换。颠换：嘌呤和嘧啶之间的替换。 碱基插入（base inseration）：通常指较长的碱基序列增加。有时插入序列本身携带遗传信息，如转座成分。转座成分的插入可使插入位点的基因失活，同时又带进新的基因。 碱基缺失（base deletion）：通常指较长的一段碱基序列的缺少。缺失突变的回复突变率很低 移码突变（frame shift mutation）：插入、缺失一个或两个碱基引起阅读框架的改变。移码突变可能产生新的终止密码，导致蛋白质合成过早终止。如果经突变造成蛋白质必需基因的改变，将使蛋白质功能丧失。 根据对遗传信息的改变情况进行分类，可分为： 同义突变（synonymous mutation）又称沉默突变（silent mutation）：由于密码子具有兼并性，单个碱基置换后未引起编码氨基酸变化，例如GCG的第三位G被A取代而成GCA，则mRNA中相应的密码子CGC就被转录为CGU，CGC和CGU都是精氨酸的密码子。 错义突变（missense mutation）：是指DNA分子中的核苷酸置换后导致合成的多肽链中一个氨基酸被另一氨基酸所取代。如镰刀贫血病，血红蛋白β亚基多肽链的第6个氨基酸是谷氨酸，其mRNA分子正常编码为：GAA或GAG。如果基因正链上GAG中的一个碱基A变成T，即从GAG→GTG，则其转录产物mRNA上密码子变成了GUG，GUG是代表缬氨酸。这样谷氨酸被缬氨酸取代。 无义突变（nonsense mutation）：当单个碱基置换导致出现终止密码子(UAG、UAA、UGA)时，多肽链将提前终止合成，所产生的蛋白质(或酶)大都失去活性或丧失正常功能。例如，DNA分子模板链中ATG的G被T代替时，相应的mRNA上的密码子便从UAC变成终止信号UAA，因此翻译便到此为止，使肽链缩短。 4. 根据突变表现型对外界环境的敏感性分类 非条件性突变（nonconditional mutation） 条件性突变（conditional mutation）根据研究目的选择一定的条件，使细胞产生一定的突变，但能正常生长或近乎正常。最常用的条件是温度，因为温度宜控制，所以最常见的条件型突变为温度敏感突变（temperature sensitive mutation） 5. 从突变效应背离或返回到野生型可分为： 正向突变（forward mutation）指由野生型变为突变型是正向突变。 回复突变（backmutation or reverse mutation），回复到野生型的突变。 6. 影响基因调控序列： 突变位点可能存在于负责基因调控的DNA序列中。 如突变位点在启动子区域，则有可能造成启动子上升突变（promoter up mutation）或下降突变（ promoter down mutation）。 如果突变位点发生在操纵子（operator），使操纵子的阻遏蛋白结合位点发生突变，则不能结合阻遏蛋白 或突变发生在调节基因上使其不能产生有功能的阻遏蛋白。 突变位点位于操纵子或调节基因的突变造成的两种结果都使结构基因失去了负向控制，使细胞不能根据需要来控制蛋白质生成，即细胞产生不依赖于需要的，有固定数量的蛋白质； 基因的这种表达方式叫组成型表达。 产生这种表达方式的操纵子突变或调节基因的突变叫做组成型突变（constitutive mutation）。启动子突变体和组成型突变体是研究基因调控