产PVL毒素金黄色葡萄球菌在小鼠坏死性肺炎中的致病机制-临床检验诊断学专业论文.docx

PAGE PAGE 10 产 PVL 毒素金黄色葡萄球菌在小鼠坏死性肺炎中的致 病机制 中文摘要 目的：了解产 Panton-Valentine 杀白细胞素（PVL）金黄色葡萄球菌在小鼠坏 死性肺炎中的致病作用和致病机制，为临床诊治提供理论基础。 方法：将 36 只小鼠随机分为模型Ⅰ组、模型Ⅱ组和对照组。模型Ⅰ组气管灌 注 PVL（－）MRSA 菌悬液、模型Ⅱ组灌注 PVL（+）MRSA 菌悬液，对照组灌 注生理盐水。比较各组小鼠体重、白细胞数及肺组织病理改变，同时收集肺支气 管肺泡灌洗液（BALF）中的脱落细胞，使用瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态、电子 显微镜（EM）观察超微结构、流式细胞术（FCM）检测凋亡率和坏死率；免疫组 织化学检测细胞色素 C 的释放和凋亡蛋白酶（caspase-3、-8、-9）。 结果：成功建立小鼠肺炎模型，模型Ⅰ组在感染后外周血白细胞计数升高、 模型Ⅱ组下降，两组存在显著差异；病理检查发现模型Ⅰ组和Ⅱ组肺组织支气管 周围和肺间质内均有炎细胞浸润，部分肺泡完整性被破坏，但模型Ⅱ组肺间质内 有纤维素渗出，肺间质和肺泡内可见大量红细胞，支气管上皮细胞破坏，组织坏 死；瑞氏-吉姆萨染色和电子显微镜结果显示，模型Ⅰ组和Ⅱ组 BALF 中脱落细胞 均可见中性粒细胞凋亡，但模型Ⅱ组中同时可见较多的细胞坏死；流式细胞术结 果显示，模型Ⅰ组与Ⅱ组中细胞凋亡率较对照组明显增高，两组之间无统计学意 义 ， 模 型 Ⅱ 组 中 细 胞 坏 死 率 高 于 模 型 Ⅰ 组 ； 免 疫 组 化 结 果 显 示 ， 模 型 Ⅰ 组 caspase-8 、caspase-3 明显阳性，细胞色素 C 阴性，caspase-9 阴性，模型Ⅱ组 caspase-8、caspase-3 caspase-9 和细胞色素 C、均阳性。 结论： PVL（＋）MRSA 的致病性强于 PVL（－）MRSA，所引起的小鼠肺 部病理改变，以组织坏死和红细胞渗出为主；PVL（＋）MRSA 既可以引起中性 粒细胞凋亡，也可以引起细胞坏死。PVL（＋）MRSA 可通过线粒体途径和死亡 受体途径诱导肺组织细胞凋亡，PVL（－）MRSA 通过死亡受体途径诱导细胞凋 亡，推测 PVL 毒素可能通过线粒体凋亡途径发挥作用。 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、Panton-Valetine 杀白细胞素 （PVL）、坏死性肺炎、社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（CA- MRSA）、多 形核细胞（PMNs） Staphylococcus aureus Panton-Valentine Leukocidin Contributes to Necrotizing Pneumonia Abstract Objective: to study the pathogenic mechanism of Panton-Valentine Leukocidin- producing Staphylococcus aureus causes Necrotizing Pneumonia. Methods：36 mice were randomly distributed into three groups, ModelⅠwas PVL -negative MRSA group, Model Ⅱwas PVL -positive MRSA group and the normal control. Lung histology of mice infected with PVL -negative MRSA and PVL positive MRSA or inoculated with normal saline. Before intratracheal instillation, 24hour and 48hour, the weight peripheral blood WBC of mice in each groups were counted and compared. And the lung tissue’s morphologic were observed after Hematoxylin-eosin. Furthermore, the exfoliated cells of BALF were collected, and their morphologic were observed by the Wright-Giemsa stain 、 their ultrastructure were observed by the transmission electron microscopy (TEM) and their apo