组织学与胚胎学的研究方法-医学课件.ppt

1、一般光学显微镜术 切片制备 石蜡切片：最常用 冷冻切片：常用于酶组织化学染色 涂片、磨片、铺片、连续切片 染色 碱性染料：含氨基、二甲氨基等碱性助色团的染料 酸性染料：含有羧基、羟基、磺基等酸性助色团的染料 嗜酸性、嗜碱性、中性 最常用的染色方法是苏木精和伊红染色法，简称HE染色法 * * 2、几种特殊显微镜的应用 荧光显微镜：用来观察标本中的自发荧光物质或以荧光素染色或标记的细胞和结构 相差显微镜：用于观察组织培养中活细胞形态结构 暗视野显微镜：用于观察因反应或分辨力不足的微小颗粒，可分辨0.004-0.2微米的微粒，适用于观察细胞内线粒体运动及标本中细菌等微粒的运动 共聚焦激光扫描显微镜：可对细胞的多种功能进行全自动、高效、快速微量定性和定量研究等 * 3、 histochemistry 和 cytochemistry 糖类：显示多糖和蛋白多糖的常用方法是过碘酸希夫反应（PAS反应），原理 多糖 醛 紫红色沉淀 过碘酸 氧化 Schiff 试剂 * PAS染色示肝糖元 * PAS染色 * 脂类：包括脂肪和类脂。标本用甲醛固定，冷冻切片，脂类保存较好。常用苏丹染料、油红O，尼罗蓝等溶于脂类的染料染色 酶：目前有100多种酶组织化学染色法，基本原理是利用酶对其相应底物的水解、氧化等作用，然后再使底物的反应产物与某种捕获剂发生反应，形成沉淀或有色的最终产物，借此检测该酶在组织切片或细胞内的分布及活性强弱 核酸：显示DNA的传统方法是福尔根反应(Feulgen reaction)，切片先用稀盐酸处理，使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的联接键打开，形成醛基，再与希夫试剂作用。原理同PAS反应，使细胞核DNA显紫红色 * 4、immunocytochemistry/immunohistochemistry 是应用免疫学原理，通过抗原与抗体的特异性结合，显示组织内和细胞内的多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。。这种检测技术的特异性强、灵敏度高、应用广泛，是生物学和医学领域中的重要研究手段。通常需对已知抗原或抗体进行标记，用相应的显色和观察方法检测目的抗体或抗原。常用的标记物有荧光素、铁蛋白、辣根过氧化物酶等 * * * * * * 荧光素标记显示皮肤毛细血管内皮细胞 免疫组织化学 * 免疫荧光技术 * 5、原位杂交技术(in situ hybridization) 是一种核酸分子杂交技术，通过检测细胞内mRNA和DNA序列片段，原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。基本原理是用已知碱基序列并具有标记物的RNA或DNA片段即核酸探针（nucleic acid probe），与组织切片或细胞内的待测核酸进行杂交，通过标记物的显示，在显微镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位。用核酸杂交技术检测细胞内某一基因在染色体上的定位，称染色体原位杂交。用核酸杂交技术检测某一基因的转录物mRNA的细胞定位和转录状况，称细胞原位杂交 * 核酸探针：主要有三种 利用大肠杆菌重组带有目的基因的质粒DNA，制成互补DNA探针（cDNA） 应用限制性核酸内切酶消化制成线性DNA模板，在体外转录获得反义RNA探针（cRNA） 依照待测核酸的核苷酸序列，应用DNA合成仪合成寡聚核苷酸探针 * 原位杂交示脐静脉内皮细胞呈心房钠尿肽阳性 * 6、电子显微镜术 * 透射电镜术Transmission electron microscopy，TEM 是用电子束穿透标本，经过电磁场的会聚、放大后，在荧光屏上显像，或将影像投射到照相底片 由于电子束穿透力弱，故经过固定的电镜标本需制成超薄切片（50～80 nm） ，并用重金属盐如柠檬酸铅和醋酸铀等染色 * go go go go go go go go go go go go go go go go go go 组织胚胎学--人体发育和功能组织学 组胚教研室 王海涛 欢迎大家学习 * 组织学与胚胎学的早期研究和发展 现代组织学与胚胎学的研究和发展 我国组织学和胚胎学的研究和发展 组织学与胚胎学的研究方法 内容提要 * 组织学(histology)：研究机体微细结构及其相关功能的科学 胚胎学(embryology)：研究个体发生发育及其有关机制的科学 基础：细胞学 研究方法：显微镜观察 研究水平：细胞、亚细胞 在发展历程中，二者的研究内容相互交叉和推进 组织胚胎学(histo-embryology)：人体发育和功能组织学 * 个体发生起始于受精卵。 受精卵经分裂增殖和细胞分化，形成多种不同类型的细胞(cell) 。 机体的一种或几种细胞聚集形成一定构型的组织(tissue)。组织由细胞和细胞间质（细胞外基质）组成。组织有多种类型，每种