结核病实验室检查的临床意义-医学课件.ppt

缺点： 不能区别结核分枝杆菌和非结核分支杆菌 不能区别死菌跟活菌。 结核杆菌暴露于异烟肼时，某些条件会失去抗酸性，出现假阴性。 检测灵敏度较低（104-105 个细菌/毫升）。 * 分枝杆菌分离培养 结核菌培养仍是目前诊断结核病的金标准．尤其是药敏试验结果在指导临床用药及耐药性检测等方面具有重要作用, 是鉴定是否为活菌的可靠方法． 传统的固态培养法 需要4～6周才能检测到结核菌的生长．而且阳性率也只有30％-40 ％；特异性差．各种分枝杆菌均可生长。要确定是否为结核菌．需结合分枝杆菌菌种鉴定和药物敏感性试验。 快速培养法: 检测细菌生长过程中代谢产生的CO2或消耗的O2，显微镜直接观察、变色液体培养基等。 快速培养法阳性的报告时间大概是1—3周左右，比传统的固态培养法快，但是仪器价格太昂贵。 * 确诊结核病 1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+1份痰标本结核分枝杆菌培养阳性即可确诊。 痰涂片阴性，肺部影像学检查符合活动性肺结核影像学表现+1份痰标本结核分枝杆菌培养阳性 结核菌培养临床价值 * 用于耐多药结核疗效判定 治愈： （1）患者完成疗程，且在疗程的后12个月，至少最后5次痰培养（每次间隔至少30天）连续阴性。 （2）如出现1次痰培养阳性，其后痰培养（间隔至少30天）最少连续3次阴性。 失败： 治疗的最后12个月，5次痰培养中有两次或两次以上阳性；或者在最后的3次，培养中有任何一次是阳性。 * 分离培养的优点 敏感性较直接涂片法高，理论上10-100条菌/毫升可检出阳性； 特异性较直接涂片法高，可以从菌落生长速度、色素产生初步判断非结核分枝杆菌； 分离出具有活力的纯培养物，为进一步药敏试验提供基础。 * 分离培养的缺点 需时长，根据接种量的大小，一般2-8周才能得到肉眼可见菌落。 结果受标本保存运送时间、培养基成分和质量、前处理方法等影响， 操作较直接涂片法复杂，需经严格培训 ，对实验室要求也是较高。 成本是直接涂片法的7-8倍。 * 结核病 实验室检查 细菌学检查 免疫学检查 分子生物学检查 涂片染色镜检 分枝杆菌分离培养 分支杆菌药敏试验 分枝杆菌菌种鉴定 体液免疫学检查 细胞免疫学检查 * 体液免疫学检查（血清学检查） 结核抗体测定 结核抗原测定 循环免疫复合物测定 * 血清学诊断 血清学诊断技术优势：是一种对疾病进行早期诊断的理想方法。 无需活细胞培养和特殊仪器设备 操作简便 结果显示快速 目前用于血清学诊断的主要方法: 酶联免疫吸附试验(ELlSA) 斑点金免疫渗滤法(DIGFA) 免疫印迹法(Western Blotting)等等 * 2011年WHO正式公告：由于目前的商业血清学试剂在结核检测中存在较大差异，且检测结果很高比例的假阳性和假阴性，因此不建议使用血清学方法作为结核杆菌的诊断实验1 。 1WHO Commercial Serodiagnostic Tests for Diagnosis of Tuberculosis. /publications/2011/9789241502054_eng.pdf 血清学检测的评价 原因：由于所用的测定方法、使用的试剂种类或抗原、抗体的不同等，导致测定结果差异较大，并且缺乏可比性。 WHO对来自不同国家的19种试剂盒产品进行评估，结果表明：与痰培养相比，这些试剂盒检测的灵敏度为1%~60%，特异度为53~99% 1 。 * 结核病细胞免疫学检查 结核菌素皮肤实验 蛋白水平分子诊断:γ-干扰素释放实验（IGRA) * 迟发型细胞超敏反应 1）方法：1:2000 OT或PPD液0.1毫升(5单位)，左前臂屈侧中部皮内注射，48～72h测量皮肤硬结的直径。 结核菌素实验（PPD试验） * 2）判断标准： 阴性≤4mm 弱阳性5-9mm 阳性10-19mm， 强阳性≥20mm 或局部出现水泡 与坏死 * 3)结核菌素试验的意义 阴性：无结核菌感染；不能排除结核感染。 阳性：曾有结核感染，并不一定现在患病。 强阳性：活动性结核病可能 A、变态反应尚未建立；B、免疫抑制如应用皮质激素或营养不良等 * PPD所含抗原为致病性分枝杆菌、环境分枝杆菌及卡介苗菌株所共有，其结果受到卡介苗接种及其他分枝杆菌感染的影响，特异性较差。 当出现免疫功能低下时可出现假阴性结果，敏感性低。 免疫力正常的阴性有一定意义。强阳性有一定意义。有结核变态反应、淋巴结核强阳性多。 经济、简便，可以用于流行病学大规模的筛查和普查，但存在着明显的缺陷。 PPD试验临床价值 * 结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T