实验七-饥饿与饱食对肝糖原含量的影响.pptVIP

一、实验目的和要求 1.掌握饥饿与饱食对小白鼠肝糖原含量的影响 2.熟悉肝糖原提取鉴定的原理和方法 3.掌握低速常温离心机的使用，了解离心技术 二、实验原理 二、实验原理 二、实验原理 三、器材和试剂 四、操作 四、操作 四、操作 四、操作 四、操作 五、实验结果 * 目 录 * 目 录 实验七 饥饿与饱食对肝糖原含量的影响 肝糖原是由许多葡萄糖分子聚合而成的物质，是动物机体能够迅速动用的糖储存形式之一。 血糖 肝糖原 分解 糖原合成 肝（肌）糖原 胰高血糖素 胰岛素 提取:用三氯醋酸破坏肝组织的蛋白质和酶，使其沉淀而保留糖原，再用乙醇将糖原从滤液中沉淀出来，溶于热水中，即为糖原溶液。 性质:糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。 定量:肝糖原在浓硫酸中水解为葡萄糖后，分子内部脱水缩合成5-羟甲基-α-呋喃甲醛。后者与蒽酮反应生成蓝色化合物，在620nm波长下有最大光吸收。 1.主要器材：手术盘、剪刀、镊子、天平、研钵、离心机、离心管、恒温水浴箱、分光光度计、微量进样器、试管及试管架、白瓷凹皿 2.主要试剂： （1）蒸馏水 （2）5%三氯乙酸 （3）标准的葡萄糖溶液：0.5ml相当于25ug葡萄糖 （4）95%乙醇 （5）碘试剂：I2 100mg 及KI 200mg溶解于30ml蒸馏水中 （6）0.2%蒽酮试剂 小白鼠 断头处死 0.5g肝脏 2ml 5%三氯乙酸 研钵中研为匀浆 离心管 3ml 蒸馏水洗涤 上清液转移至另一离心管中 4000rpm 离心3min 沉淀即为初步纯化糖原。加2ml H2O溶解，吹打混匀，即为肝糖原提取液 加5ml 95%乙醇，混匀，静止1min，4000r/min离心5min 观察对比两组溶液现象 取0.5ml定量检测 取2滴于白瓷凹皿中 观察、记录两组颜色，与蒸馏水比较 加入碘试剂1滴 1.性质：糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。 2.定量： 糖原浓度(μg /ml)=Au/As ×Cs× 1/1.11 肝糖原含量=糖原浓度×100/0.5×液体体积×10–6 注：1.11是用此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的系数，即100μg糖原用蒽酮试剂显色相当于111μg葡萄糖用蒽酮试剂所显的色。