实验5-琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制.pptVIP

实验五 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 【实验目的】  了解丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。 【器材与试剂】 （一）器材 1. 恒温水浴锅 2. 手术剪 3. 研钵 4. 试管 5. 试管架 6. 刻度吸管 7. 漏斗 8. 小白鼠的肌肉 9. 脱脂棉 10. 吸水纸 【实验步骤】 1. 制备肌提液（酶液）：取新杀死的动物肌肉3～5g，加冷的磷酸缓冲液研磨，过滤，低温保存，备用。 3. 将各试管摇匀，倾斜试管，沿管壁滴加液体石蜡5滴，盖在液面，以隔绝空气。置于370C水浴中保温，随时观察各管中美蓝的褪色情况，并记录时间，解释结果。 【思考题】 1. 为什么酶液的提取要在冰浴中进行？ 2. 各管中美蓝的褪色情况有何不同？为什么？ * * 生物化学实验之－－ 山东师范大学生命科学学院 【实验原理】  由于丙二酸与琥珀酸结构相似，可以竞争性地抑制琥珀酸脱氢酶对于琥珀酸的脱氢作用。 在生物体内，肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶，能催化琥珀酸脱氢转变成延胡索酸，同时放出大量能量供肌体利用。 在生物体外，可以人为地提供无氧的条件进行实验，反应中生成的FADH2可使氧化型美蓝（蓝色）转变成还原型美蓝（无色）。因此，可以从美蓝的颜色变化观察琥珀酸脱氢酶的作用。 （二）试剂 1. 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） 2. 0.02mol/L丙二酸钠溶液 3. 0.02mol/L琥珀酸钠溶液 4. 0.01%美蓝溶液 5. 生理盐水 6. 液体石蜡 5 5 5 0.01%美蓝溶液（滴） 2 2 2 0.02mol/L琥珀酸钠溶液（ml） 1 — 1 蒸馏水（ml） — 1 — 0.02mol/L丙二酸钠溶液（ml） 2（煮沸） 2 2 肌提液 （ml） 3 2 1 试管编号 试剂 2. 取试管3支，按下表操作。 【要点提示】 1. 提取酶液需在冰浴中进行，以防酶失活。 2. 实验过程中，需快速加入试剂，摇匀后迅 速加入液体石蜡。 3. 加液体石蜡的目的是为了使反应液与空气隔绝，因此加液体石蜡时需斜执试管，沿管壁加入，不要产生气泡。 4. 加完液体石蜡后，在观察结果的过程中，不要摇动试管，以免溶液与空气接触而使美蓝重新氧化变蓝。