双光子激光扫描共聚焦显微镜-浙江大学室与设备管理处.DOC

PAGE 第PAGE 1页 编号： 编号： 浙江大学 购置大型仪器设备可行性论证 与审批报告 仪器设备名称 双光子激光扫描共聚焦显微镜 申 请 单 位 985农生环平台 实验室（所） 申 请 人 彭金荣 经 费 来 源 985经费 项 目 负 责 人 朱 军 申 请 日 期 2010.11 实验室与设备管理处制 仪器设备中文名称 双光子激光扫描共聚焦显微镜 仪器设备外文名称 Laser Scan Confocal Microscope 型号规格 申购数量 1 单价估计 人民币(元)：略 (折合)外币： 主要技术指标 显微镜分辨率0.20um (100 x 11.45 oil 物镜)； 正轴移动精度50nm； 点扫描，线扫描，面扫描，扫描精度 1 x 1 到 2048 x 2048； 扫描装置两个独立电流测定扫描镜，DSP控制，提供超短波激光谱线和帧回扫时间； 扫描速度13 x 2 速镜台，最高5 帧/秒，512x512 像素，每行512象素时，最少o.38ms； 扫描放大倍数0.7x 至40x,，数字式，每次可调 0.1；扫描旋转360度自由旋转，每次可调1度，自由xy补偿； 2个探测通道，一个透射光通道。 激光器：紫外光激光器、氩离子激光器30mW、氦氖543激光器1mW、氦氖633激光器5mW和近红外脉冲激光器50mW，激光器波长有 405 nm、458 nm、477 nm、488 nm、514 nm、543 nm和633 nm；双光子激光波长700-1000 nm，连续可调。 光学显微镜：倒置显微镜；目镜为10倍；物镜系列为10倍、20倍、40倍、油镜40倍、油镜63倍、油镜100倍；明场BF、DIC和PH等。 荧光附件：103W 汞灯，六位电动滤色镜转盘，电动光闸，含UV、B、G激发滤色镜组件。 可控温载物台，CO2培养盒。 主要功能、应用范围 与共享学科 主要功能： 常用于定位、定性和定量的检测生物样品中分子和离子等成分变化、生理功能改变，对生物组织、细胞及其亚细胞结构进行形态学观察。其特殊的功能有多色荧光叠加、3D重构、荧光共定位、时间序列（长时间序列）、荧光能量共振转移（Fret）和荧光恢复 (FRAP) 、双光子激光细胞膜打孔等。 应用范围： 细胞生物学： 如：细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化、细胞凋亡机制；各种细胞器、结构性蛋白、DNA、RNA、酶和受体分子等细胞特异性结构的含量、组分及分布进行定量分析；DNA、RNA含量、利用特定的抗体对紫外线引起的DNA损伤进行观察和定量；分析正常细胞和癌细胞细胞骨架与核改变之间的关系；细胞黏附行为等。?? 2.生物化学： 如：酶、核酸、受体分析、荧光原位杂交、杂色体基因定位等，利用共聚焦技术可以取代传统的核酸印迹染交等技术，进行基因的表达检测，使基因的转录、翻译等检测变的更加简单、准确。 3.药理学：如：药物对细胞的作用及其动力学；药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量。 4.生理学、发育生物学： 如：膜受体、离子通道、离子含量、分布、动态；动物发育以及胚胎的形成，骨髓干细胞的分化行为；细胞膜电位的测量等。 5.遗传学和组胚学： 如：细胞生长、分化、成熟变化、细胞的三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断。 6.神经生物学：如：神经细胞结构、神经递质的成分、运输和传递。 7.病理学及病理学临床应用：如：活检标本的快速诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病的诊断。 8.免疫学：免疫荧光标记（单标、双标或三标）的定位，细胞膜受体或抗原的分布,微丝、微管的分布、两种或三种蛋白的共存与共定位、蛋白与细胞器的共定位；对活细胞中的蛋白质进行准确定位及动态观察可实时原位跟踪特定蛋白在细胞生长、分裂、分化过程中的时空表达。 与共享学科：农学、昆虫、动科、环资、医学等生物类学科以及部分材料学科。 申 购 理 由 和 必 要 性 双光子激光扫描共聚焦已经成为活体细胞和生物组织无损伤成像研究的重要工具。与单光子激光扫描显微镜相比有以下的优点： 对样品的光漂白区域和光毒性小，适合长时间的观察和研究活体细胞和组织。因为共焦孔径光阑必须足够小以获得高分辨率的图像，而孔径小又会挡掉很大部分从样品发出的荧光，包括从焦平面发出的荧光，相应的，激发光必须足够强以获得足够的信噪比；而高强度的激光会使荧光染料在连续扫描过程中迅速褪色，荧光信号会随着扫描进程度进行变得越来越弱。光毒作用是另外一个问题，在激光照射下，许多荧光染料分子会产生诸如单态氧或自由基等细胞毒素，所以实验中要限制扫描时间和激发光的光功率密度以保持样品的活性。在针对活性样品的研究中，尤其是