第十六章药物分析中的新技术新方法（修订版）.ppt

3. 毛细管凝胶电泳 凝胶的网络结构对溶质具有分子筛的作用，可分离质荷比相同但分子大小不同的组分。 在分子生物学和蛋白质化学上有着十分广泛的应用。 * 4. 毛细管等电聚焦 根据蛋白质的等电点不同而进行分离。 A A A A A A B B B B B B C C C C D D D D D E E E E E F F AA AA BB BB CC CC DD DD EE EE FF FF pH梯度 高 低 * 应用： 1. 监测药物生产过程 如：监测青霉素发酵液中有关物质的量 * 青霉素发酵液的高效毛细管电泳图 1. 青霉素G钠 ；2. 6-APA ；3. 对羟基苯乙酸 ； 4. 邻羟基苯乙酸 ；5. 苯乙酸 * 2. 中药成分分析 如：黄酮及其甙类分析 * 黄芩中6种黄酮类成分的 胶束电动毛细管色谱分离图 1.汉黄芩甙；2. 黄芩素；3.黄芩甙；4. 千层子素；5. 汉黄芩素；6.内标水杨酸；7.白杨素 * 3. 手性拆分 4. 体内分析 * 质谱法及其应用 进样系统 离子源 质量分析器 检测器 控制和数据处理系统 真空系统 * 一、手性药物的现状 手性药物（579） 药物（1992） 天然和半合成药物（556） 合成药物（1436） 非手性药物（857） 单一异构体（73） 外消旋体（506） 手性药物（547） 非手性药物（9） 单一异构体（537） 外消旋体 （10） * 二、手性药物对映体的药效学差异 1. 治疗作用完全依赖一种异构体 如：S(-)-α-甲基多巴 2. 药理作用差别不大 如：异丙嗪 3. 药理作用类似，但反应强度有差别 4. 药理与毒理作用存在“质”的区别 * 二、手性药物对映体的药动学差异 1. 吸收 2. 蛋白结合 3. 代谢 * 1. 间接法拆分对映异构体即衍生化试剂法（CDR） 2. 直接法拆分对映异构体 手性固定相法（CSP） 手性流动相添加剂法（CMP） 三、手性药物拆分的高效液相色谱法分类 采用非手性固定相 * 四、拆分原理： 为了使对映体转化为化学和物理性质不同的非对映体，就要提供一种手性源（ CDR ） ，使待拆分的对映异构体（样品）、手性作用物（如固定相）和手性源之间形成一个非对映异构分子的络合物。 三点手性识别模式 * (R) –SE+ (R) –SA → (R) –SE –(R) –SA (S) –SA→ (R) –SE –(S) –SA 1. CDR * 柱前手性衍生化法：对映体混合物以手性试剂作柱前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见手性）固定相分离。 对手性衍生化试剂的要求：高光学纯度。 常用的手性衍生化试剂：羧酸衍生物类、胺类、异硫氰酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、固相衍生化试剂。 * * 手性衍生化特点： 需要高光学纯度的手性衍生化试剂； 反应繁琐费时； 衍生化反应速率重现性较差 只需使用价格便宜、柱效较高的非手性柱 衍生化过程可同时纯化样品 * 柱前衍生化-反相高效液相色谱法 拆分酮洛芬对映异构体 S-(?)-酮洛芬 R-(-)-酮洛芬 * 酮洛芬对映体的柱前衍生化示意图 ＊ ＊ * 酮洛芬对映体的柱前衍生化方法 酮洛芬对照品溶液(1 mg/mL)0.1 mL 加入正己烷0.6 mL 二氯亚砜溶液 0.2 mL 75℃ 1 h 冷却至室温 吹干后加入S-NEA溶液0.2 mL 5 min 振摇 加入2.0 mol/L H2SO4 0.5 mL 混匀 吹干后溶解进样 二氯甲烷:乙醚 2:1 * 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18, 5 ? m, 150?5.0mm ID， 流动相：乙腈?水-乙酸-三乙胺(55 : 45 : 0.1 : 0.02，v/v)， 流速： 1 ml/min, 检测波长：254 nm * 酮洛芬对映体衍生化物色谱图 R S 酮洛芬对映体衍生化物的保留时间为tR=7.3 min，tR=8.5 min，分离度为1.9 * 2. CSP 利用手性固定相与对映体消旋物相互作用，其中一个与手性固定相生成不稳定的短暂的对映体复合物，使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同，从而得到分离。 * 常用的手性固定相： 1. Pirkle型固定相 2. 合成多聚固定相 3. 环糊精键合固定相 * 特点 适用范围广 制备分离方便 定量分析的可靠性高 价格昂贵 * 奈基乙脲键合硅胶柱拆分苏氨酸（A）和苯丙氨酸（B）的p-溴代苯甲酰胺衍生物对映体色谱图 * 3. CM