儿童新甲型(H1N1)流感疫苗接种后疫苗特异性初始T细胞及记忆T细胞表型研究-免疫学专业论文.docx

中文摘要 儿童新甲型（H1N1）流感疫苗接种后的疫苗特异性 初始 T 细胞及记忆 T 细胞的表型研究 目的：通过研究儿童甲型 H1N1 流感疫苗的远期特异性初始 T 细胞和记忆 T 细 胞的表型特征，为接种甲型 H1N1 流感疫苗的远期效果评价及新疫苗研制和接种 策略提供理论指导。 方法：（1）在家长自愿的基础上，选择 31 例于 2009 年 12 月～2010 年 1 月在 深圳市龙岗区妇幼保健院接种甲型 H1N1 流感疫苗的 3～6 岁儿童为研究对象。 （2）抽取外周静脉血 3ml，分离淋巴细胞加入甲型 H1N1 流感疫苗为实验组， 设未加疫苗为对照组，置 5% CO2 培养箱中 37℃培养 50h。以 FCM 分别检测细 胞表面分子：CD4/CD8、CD45RA、CD45RO、CD62L、CCR7。 （3）实验组与对照组置 5% CO2 培养箱中 37℃培养 50h 后加入 CCK-8 试剂继续 培养 1h。以 CCK-8 法检测细胞增殖，计算细胞增殖指数。 结果：（1）PBMC 中 CD4+和 CD8+T 细胞组成比例以 CD4+T 细胞为优势，P﹤ 0.05；CD4+T 细胞在实验组的占比为 29.85%，明显低于对照组的 39.00%，P﹤0.05； CD8+T 细胞在两组中所占比例无明显差异，P﹥0.05。 （2）CD4+CD45RA+初始 T 细胞在实验组与对照组的比例均高达 70%以上，两组 比较差异无统计学意义，P﹥0.05；按抗体水平高低分三组进行比较差异无统计 学意义，P﹥0.05。在 CD8+CD45RA+也得到相似的数据。 （3）CD4+CD45RO+记忆 T 细胞在实验组占 28.54%，在对照组占 25.52%，两组 比较差异无统计学意义，P﹥0.05；按抗体水平高低分三组进行比较差异无统计 学意义，P﹥0.05。 （4）CD4+CD45RO+记忆 T 细胞二个亚群检测结果：CCR7 和 CD62L 单阳性记 忆 T 细胞亚群在实验组占比明显低于对照组的占比，P﹤0.05。 （5）CD8+CD45RA+初始 T 细胞在实验组与对照组的占比均高达 80%以上，两组 比较差异无统计学意义，P﹥0.05；按抗体水平高低分三组进行比较差异无统计 学意义，P﹥0.05。 2 （6）CD8+CD45RO+记忆 T 细胞在实验组与对照组均占 17-19%，P﹥0.05；按抗 体水平高低分三组进行比较差异无统计学意义，P﹥0.05。 （7）CD8+CD45RO+记忆 T 细胞二个亚群检测结果：CCR7 和 CD62L 单阳性记 忆 T 细胞亚群在实验组的占比明显低于对照组的占比，P﹤0.05。 （8）应用 CCK-8 法检测疫苗刺激后抗原特异性增殖，检测结果见细胞增殖指数 大于 0.8 的仅为 51.16% ，大于 1.0 在本研究中没有。 结论：（1）本研究表明 31 例儿童 T 细胞 CD4+为优势细胞，初始 T 细胞 CD45RA+ 均较高，具有抗原再刺激后再应答的基础；但实验组初始 T 细胞不高，说明对 该疫苗的免疫记忆基础差。 （2）本研究 31 例儿童 CD4+记忆 T 细胞为主要表型特征。疫苗特异性记忆 T 细 胞结果提示甲流疫苗接种 3 年多后特异性记忆 T 细胞数量不多，其功能无特异 性再次应答。 （3）本研究 31 例儿童记忆 T 细胞亚群具有多样性，以中央型记忆细胞为主要 表型特征；细胞增殖指数结果表明疫苗特异性细胞增殖不佳。 关键词：儿童 新甲型（H1N1）流感疫苗 免疫接种 远期免疫 免疫记忆 3 Study on the phenotypic characterization of naive and memory T cell after immunization with H1N1 influenza vaccine for children Abstract Objective: Study on the phenotypic characterization of naive and memory T cell in H1N1 influenza vaccine for children, in order to provide theoretical guidance for evaluating of long-term effect of the H1N1 influenza vaccine and developing new vaccines and vaccination strategies. Methods: （1）Based on parents’ volunteer, we chose 31cases as the objects of our st