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型猪链球菌低分子量酪氨酸磷酸酶的制备及酶学研究
中国人兽共患病学报
588 , ()
ChineseJournalofZoonoses 2018 34 7
: / 论 著
DOI10.3969 .issn.1002-2694.2018.00.103
j
2型猪链球菌低分子量酪氨酸磷酸酶的
制备及酶学研究
, , ,
12 12 2 2 2 12
, , , , ,
吴倩倩 潘秀珍 李超龙 侯红芬 王长军 高基民
: ( , ) (
摘 要 目的 表达纯化 型猪链球菌 低分子量酪氨酸磷酸酶
2 Stretococcussuis2SS2 Lowmolecularweihtrotein
p g p
, ), , .
trosine hoshataseLMWGPTP 测定 LMWGPTP磷酸酶活性并鉴定其酶活性位点 为后续的功能鉴定奠定基础 方法
y p p
分别构建野生型 基因表达质粒 : 、突变型 基因表达质粒 :
LMWGPTP pET28aLMWGPTP LMWGPTP pET28aLMWGPTPC33A
: , ( ), ,
和pET28aLMWGPTPR39A 重组质粒转化E.coilBL21DE3 筛选阳性转化子 通过 IPTG诱导表达后经 SDSGPAGE鉴定
. , .
表达产物 镍柱亲和层析纯化得到重组蛋白经 Westernblot鉴定 野生型 LMWGPTP免疫新西兰兔制备兔多克隆抗体 以
( ) .
对硝基苯酚二钠六水 为底物检测重组蛋白的磷酸酶活性 结果 成功构建野生型 基因表达质粒
PNPPGNa LMWGPTP
: 、 : 、 : ,
ET28aLMWGPTP突变型LMWGPTP基因表达质粒 ET28aLMWGPTPC33A ET28aLMWGPTPR39A 在大肠
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