果胶酶活性分光光度测定方法研究.PDF

第 14 卷第 1期 Vo.l14 No.1 JournalofQiqiharUniversity 1998年 3月 .1998 Mar 果胶酶活性分光光度测定方法的研究 冫 工 ↓ 洁 刘晓兰 李彩芹 彭 凯 (齐齐 尔大学工学院) (齐齐 尔北大仓酒厂) (齐齐 尔大学工学院) 本文论述了用分光光度法测定发酵液等成份复杂的样品中果胶 活性的新方 法。标准曲线相关系数 r=0.999⒛测定样品相对标准偏差 1.90 回收率 90%以上。此 方法准确、简便、易操作、需时短。 果胶 活性 分光光度法 ○ 果胶酶 (EC3⒙2 ⒙1⒙15 ⒕是指分解果胶质的多种酶的总称, 它可分为两大类:解聚酶和果胶 酯酶。果胶酶广泛存在于植物果实和微生物中。 果胶酶主要应用于食品工业, 特别是水果加工业。作为古老的麻料脱胶工艺, 微生物果胶 [ 1] 酶仍在沿用。此外, 近年来在木材工业中也有利用果胶酶处理木材提高防腐效果的报道 。 [2] 果胶酶活性测定一般采用粘度降低法 , 此法误差较大, 且不适用于测发酵液等成分复 杂, 果胶酶活性又很低的样品。本文所述方法很适合测定这样样品中果胶酶活性, 并且结果准 确。 一 一.一 果胶质主要是由 -半乳糖醛酸以 - D α 1⒙4糖苷键连接形成的直链状的聚合物。 其中, 部分 D-半乳糖醛酸上的羧基可为 甲醇所酯化形成甲酯。果胶酶作用 α-1⒙4 糖苷键, 水解得到 半乳糖醛酸。 D D-半乳糖醛酸是一种还原糖, 与 3, 5-二硝基水杨酸共热后被还原成棕红色的氨基化合 [3] 物, 在一定的范围内, 还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系, 可利用比色法进行测定 。 果胶酶活性国际单位定义为:在 pH4.4 ⒙45℃条件下, 每分钟水解果胶质产生 1 μmol半 乳糖醛酸所需的酶量为一个酶单位。 通过 3, 5 -二硝基水杨酸比色测定 D-半乳糖醛酸的量可计算出果胶酶活性。 一.二 日本岛津可见一紫外分光光度仪 水浴锅 [3] 3, 5 -硝基水杨酸试剂(又称 DNS试剂 ) 收稿日期:1997- 10- 15 64 齐 齐哈 尔大学 学 报 1 9 9 8年 果胶, 果胶酶 (0.34 u/ mg⒕⒙D-半乳糖醛酸均由 Sigma公司生产。 一.三 准确配制 0.1% -半乳糖醛酸溶液为标准样, 按表 1在各管中加样。 D 表 1 标准曲线绘制 管 号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 标准样 (ml⒕ 0 0.1 0.2 0.3 0 .4 0.5