唐山地区HBV感染者IL―6基因启动子区多态性分析.doc

唐山地区HBV感染者IL_6基因启动子区多态性分析 目的：探讨唐山地区汉族成年人群外 周血白细胞IL-6基因的多态现象与HBV感染的关系。 方法：采用成组病例-对照研究的方法收集179例HBV 感染者和120例健康对照，对其基因型进行比较。采 用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（PCR-RFLP） 方法检测IL-6-572，-597基因位点的基因型。结果： IL-6-597仅见野生型纯合子，未见突变型，故在基因 多态性的研究中，其不具有进一步分析的价值，而-572 位点发现三种基因型（CC、CG和GG），但对其基因型 和等位基因在两组中的分布进行x 2检验，差异无统 计学意义，但在调整了影响因素的作用后，IL-6-572GG 基因型发生HBV感染的危险性较CC基因型升高，OR 值为 2.426 （1.080?5.452），故认为 IL-6-572 与 HBV 感染有关。结论:IL-6-572可能与HBV感染有关，IL-6 -572GG基因型可能为HBV感染的危险因素。 关键词：HBV感染，IL-6,基因多态性 目前HBV感染仍是全世界所关注的公共卫生问题。 HBV感染可导致慢性乙肝，肝硬化、肝癌等不良结局， 严重威胁人类健康，估计每年大约有60万人死于HBV 感染所导致的疾病［1］。大量研宄证实细胞因子介导的 免疫反应直接参与HBV感染的全过程，IL-6作为一类 重要的细胞因子，它在HBV感染者的免疫反应中扮演 重要角色，已有研宄证实IL-6启动子区基因多态性与 慢性HCV感染及感染结局有关［2］，然而，IL-6启动子 区基因多态性是否与HBV感染有关仍需进一步研究。 故本次试验通过检测IL-6 -572，-597位点基因编码， 探讨其多态性与HBV感染的关系。 1对象与方法 1.1研究对象 收集2010年5月?2012年4月于唐山市传染病 医院及开滦医院收治的汉族成人（年龄＞18岁）HBV 感染患者179例。其中男性占132/179，其平均年龄 为35.42±12.16;研究对象均符合2010年中华医学会 肝病与感染病分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》 诊断标准。排除所有病例除外重叠其他肝炎病毒感染 且无明显其它引起肝功能异常的原因，以及心血管疾 病和感染性疾病。同时收集开溁医院参加健康体检的 人群120例为对照，男性占83/120，其平均年龄为 37.59± 10.48。所有入选人群肝功能正常，肝炎病毒标 志物均阴性。且无各种心血管疾病和感染性疾病。 1.2流行病学调查依据有关文献设计调查表，在 征得所有病例知情同意后进行问卷调查，包括一般情 况((年龄、性别、身高、体重、职业)、饮酒情况、 医疗保险、乙型肝炎家族史、乙型肝炎患者接触史等。 1.3基因型检测方法 采集空腹静脉3ml，乙二胺四乙酸抗凝，采用盐 析法提取人外周血白细胞基因组DNA。以寡核苷酸引 物 5’ -GAGACGCCTTGAAGTAACTG-3’ 为上游引物，5 -AAGTGCAGCTTAGGTCGT-3’为下游弓I物序歹0，弓I物均 由北京赛百盛公司合成。采用聚合酶链反应-限制性片 断长度多态性方法检测，PCR体系：模板DNAlul， 上下游引物(10Um/L)各 1 u I，dNTP (5mmol/L) 1 y I, TaqDNA 聚合梅(lOu/ul) 0.2 u I，mgCI2(25mmol) 2ul, 10倍反应缓冲2 Ul，加双蒸水至20 ul。PCR反 应条件：95°C预变性3 min,然后94°C变性60s, 49°C 退火lmin，72°C延伸lmin，5个循环；之后94°C变 性30s，49°C退火30s，72°C延伸30 s，28个循环； 终末延伸72°C 7 min。分别以限制性内切酶Bsrb I (-572)和 Fokl (-597)进行消化(37°C, 24h)。根 据片断大小(与标准分子量对照)及条带数确定其基 因型。-597位点GG基因型:438bp，GA基因型:438bp、 351bp、87bp, AA 基因型：351bp、87bp；而-572 位 点：GG基因型有376bp，62bp两条片断，CG基因型 有438bp，376bp, 62bp三条片断，CC基因型仅有 438bp —条片断。 1.3数据处理 应用Excel建立数据库，应用SPSS13.0统计软件 对计量资料采用t检验，计数资料采用x2检验。对 基因型频率和各潜在危险因素与HBV感染的关系采用 多因素非条件Logistic回归分析，以P0.05）。本次研宄 仅发现-597G/A位点GG基因型，未发现GA、AA基因 型，故无法进一步比较。 2.3 IL-6 -572个基因型多因素非条件Logist回归 分析 疾病的产生是由环境因素和宿主因素共同作用的 结果