双黄连粉针剂UPL―MS指纹图谱的建立及聚类分析.doc

双黄连粉针剂UPLC-MS指纹图谱的建立及聚类分析 目的建立双黄连粉针剂的超高效液相色 谱(UPLC)指纹图谱。方法采用Acquity UPLCTM BEH C18 色谱柱(2.1mmX50mm，1.7 um);流动相为 乙腈-0.1%甲酸，梯度洗脱，流速为0.3 mL/min，柱温 40 °C。对13批双黄连粉针剂的特征色谱图进行聚类 分析，同时采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统 (2004 A)》对其质量进行评价。结果建立了 13批双 黄连粉针剂的UPLC指纹图谱共有模式，特征图谱有 16个共有峰，以对照品为对照，指认了 3个主要色谱 峰，各色谱峰有较好的分离效果。各批次间一致性良 好，工艺稳定。结论本方法快速、高效，可用于全面 控制双黄连粉针剂的质量。 关键词：双黄连粉针剂；指纹图谱；超高效液相 色谱法；聚类分析 R284.1 A : 1005-5304 (2015) 06-0091-04 双黄连粉针剂由金银花、黄芩、连翘3味中药经 提取精制成中药注射剂，临床上加入适当溶媒供静脉 注射用，现己广泛用于治疗肺炎、扁桃体炎、上呼吸 道感染、急性肾盂肾炎、急性胆囊炎、小儿肠炎、婴 幼儿肺炎、流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒III型 感染等多种疾病［1］。 中药指纹图谱对中药材和中药制剂的质量控制具 有重要作用，也是中药质量标准一种重要的检测手段。 中药指纹图谱技术能标示出中药材的特征图谱和共有 峰图谱，从而辨别真伪，用于控制中药材的质量，评 价制剂原料药材、半成品及成品质量的均一性和稳定 性。超高液相色谱法（UPLC）相对于高效液相色谱法 具有更好的分离效率、峰容量及灵敏度［2］，现有的对 于双黄连粉针剂的质量控制方法是以黄芩苷、绿原酸 和连翘苷为质量控制指标，而这种质量评价方法不够 全面，因此，本试验建立双黄连粉针剂的UPLC指纹 图谱，为高效控制和评价双黄连粉针剂的质量提供依 1仪器与试药 美国Waters Acquity UPLCTM超高效液相色谱仪 （包括在线真空脱气机、自动进样器、四元梯度泵、 二极管阵列检测器和柱温箱），美国Micromass Q-TOF microTM四极杆-飞行时间质谱仪（电喷雾离子源-正、 负离子扫描方法-Lockspray），MassLynx V4.1色谱工作 站，KQ-5200E昆山舒美超声波清洗器（昆山市超声仪 器有限公司），jA-2003精密电子天平（上海市良平仪 器厂）。 对照品黄芩苷（批号110715-201314,供含量测 定用）、连翘苷（批号110821-201213,供含量测定用）、 绿原酸（批号110753-201314，供含量测定用），购于 中国食品药品检定研究院；双黄连粉针剂由哈药集团 中药二厂生产，批号 1409405、1409406、1409407、 1409408、 1409409 1409410、 1409411、 1409413、 1409414、 1409416、 1409417、 1409418、 1409419。 乙腈为色谱纯（美国Fisher?公司），甲酸为色谱级（天 津科密欧化学试剂有限公司），其他试剂均为色谱纯， 水为屈臣氏蒸馏水。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱为 Acquity UPLCTM BEH C18 柱（2.1 mm X 50 mm，1.7 u m, Waters Corp, Milford USA）；流动 相A为乙腈，B为0.1%甲酸水，梯度洗脱（0—3 min, 5%—10%A； 3^5 min, 10%- -12%A； 5—9 min, 12% -14%A； 9^ 10 min, 14%一 6%A； 10-12 min, 16% ^19%A； 12- -14 min, 19%- -20%A； 14—16 min，20% -23%A； 16- *18 min, 23%- -40%A； 18-22 min, 40% ^100%A； 22 -^23 min, 100%A）；流速：0.3 mL/min;  柱温：40 °C;进样量：3 uLo 2.2质谱条件 电喷雾电离源（ESI），采用正离子扫描检测；碰 撞能：100 V;干燥气温度：350 °C;干燥器流速：11 L/min；雾化器压力：276 kPa；毛细管电压：4 kV;扫 描方式为全扫描，质量扫描范围：m/zl00?1500。 2.3对照品溶液制备 分别精密称取黄芩苷、连翘苷、绿原酸对照品， 加50%甲醇溶液分别制成每1 mL含黄芩苷0.1 mg、连 翘苷60 ug、绿原酸40 ug的混合对照品溶液。 2.4供试品溶液的制备 从每批次随机取本品5支的内容物，混匀，取本 品50mg，精密称定，置25 mL锥形瓶中，力口 50°/。甲 醇溶液20mL，密塞后超声处理（功