实验二基础培养基、细菌接种及其常用生化反应-(精选·公开·课件).pptVIP

实验二基础培养基、细菌接种及其常用生化反应 实验目的 了解细菌常用培养基 掌握细菌的分离培养技术及纯种移种法 熟悉细菌各种生长现象 熟悉细菌常用生化反应 实验内容 操作 -- 细菌接种法 分离培养法——平板划线法（葡萄球菌/大肠埃希菌） 纯种培养法 斜面培养基接种法（葡萄球菌/大肠埃希菌） 半固体培养基接种法 --- 穿刺接种法（大肠埃希菌/痢疾杆菌） 液体培养基接种法 （葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌） 示教 细菌的生长现象 液体、固体、半固体培养基 常用生化反应 乳糖发酵试验 Indol试验 硫化氢试验 尿素分解试验 细菌生长繁殖的条件 充足的营养物质 水，碳源，氮源，无机盐，生长因子 合适的外界环境 温度 酸碱度 气体 渗透压 培养基 适合于细菌生长繁殖需要的各种营养物质及在PH(7.2~7.6)条件下配制而成的基质。 培养基配成后—〉灭菌 培养基（按物理性状分类）???? 液体培养基 固体培养基: 2～3% of agar 平板：划线分离，菌落计数，分离纯化 斜面：纯种移种 半固体培养基: 0.1～0.5% of agar 观察穿刺线、保存菌种 培养基（按营养组分及用途分类） 基础培养基：多数菌生长的基本营养成份 营养培养基：营养要求高的细菌生长。加入糖，血，血清，酵母浸膏等 血平板 合成培养基：研究细菌代谢过程。特殊菌的分离培养 鉴别培养基：含有特定的作用底物 糖发酵管，葡萄糖蛋白胨水 选择培养基：在培养基中加入抑制某菌生长的物质 ?肠道致病菌选择培养基：SS培养基，抗生素培养基 ?厌氧培养基 庖肉培养基 平板划线法 注意事项??????? 不要说话，严格无菌操作 灼烧后接种环要冷却 划线时用腕力，不要使接种环嵌入琼脂 各个分区要分明 在培养皿底部贴标签 倒置培养――防止细菌被冲散??? 斜面接种法 （1）用左手握住菌种管和斜面培养基管，右手持接种环或接种针。 （2）用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。 （3）用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。 （4）伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线。 （5）接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。 半固体培养基接种法 （1）用左手握住菌种管和半固体培养管，右手持接种针 （2）用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。 （3）用接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。 （4）垂直刺入半固体中心，至近管底部，然后沿穿刺线退出。 （5）塞回棉塞，接种针重新灭菌。接种完毕，于37℃培养18—24h，观察生长情况。 液体培养基接种法 （1）用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。 （2）在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。 示教：细菌在培养基中的生长情况 In liquid medium On solid medium ： In semisolid medium ： 葡萄糖糖发酵试验 大肠埃希菌　　　产酸产气??? ????＋ 　　　　　　　　　　　　　　 产碱杆菌 　　 不发酵???? ?— 伤寒沙门菌　产酸不产气 ＋ Indol试验 大肠杆菌　　 出现红色　＋ 肖氏沙门菌　不出现红色　 - 硫化氢试验 大肠杆菌：不变色者为 阴性 变形杆菌：穿刺线部位呈黑褐色者 阳性 尿素分解试验 痢疾杆菌：不变色者为 阴性 变形杆菌： 红色 阳性 * 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 菌落 菌苔 1、3：有动力 2：无动力 *