实验二基础培养基、细菌接种及其常用生化反应-(精选·公开·课件).pptVIP

实验二基础培养基、细菌接种及其常用生化反应-(精选·公开·课件).ppt

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实验二 基础培养基、细菌接种及其常用生化反应 实验目的 了解细菌常用培养基 掌握细菌的分离培养技术及纯种移种法 熟悉细菌各种生长现象 熟悉细菌常用生化反应 实验内容 操作 -- 细菌接种法 分离培养法——平板划线法(葡萄球菌/大肠埃希菌) 纯种培养法 斜面培养基接种法(葡萄球菌/大肠埃希菌) 半固体培养基接种法 --- 穿刺接种法(大肠埃希菌/痢疾杆菌) 液体培养基接种法 (葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌) 示教 细菌的生长现象 液体、固体、半固体培养基 常用生化反应 乳糖发酵试验 Indol试验 硫化氢试验 尿素分解试验 细菌生长繁殖的条件 充足的营养物质 水,碳源,氮源,无机盐,生长因子 合适的外界环境 温度 酸碱度 气体 渗透压 培养基 适合于细菌生长繁殖需要的各种营养物质及在PH(7.2~7.6)条件下配制而成的基质。 培养基配成后—〉灭菌 培养基(按物理性状分类)???? 液体培养基 固体培养基: 2~3% of agar 平板:划线分离,菌落计数,分离纯化 斜面:纯种移种 半固体培养基: 0.1~0.5% of agar 观察穿刺线、保存菌种 培养基(按营养组分及用途分类) 基础培养基:多数菌生长的基本营养成份 营养培养基:营养要求高的细菌生长。加入糖,血,血清,酵母浸膏等 血平板 合成培养基:研究细菌代谢过程。特殊菌的分离培养 鉴别培养基:含有特定的作用底物 糖发酵管,葡萄糖蛋白胨水 选择培养基:在培养基中加入抑制某菌生长的物质 ?肠道致病菌选择培养基:SS培养基,抗生素培养基 ?厌氧培养基 庖肉培养基 平板划线法 注意事项??????? 不要说话,严格无菌操作 灼烧后接种环要冷却 划线时用腕力,不要使接种环嵌入琼脂 各个分区要分明 在培养皿底部贴标签 倒置培养――防止细菌被冲散??? 斜面接种法 (1)用左手握住菌种管和斜面培养基管,右手持接种环或接种针。 (2)用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞,将管口通过火焰灭菌。 (3)用接种环或接种针伸入菌种管内,挑取用来接种的菌苔。 (4)伸入斜面培养管内,先从斜面底部到顶端拖一条接种线,再自下而上蜿蜒划线。 (5)接种完成之后,用火焰灭菌培养管口,并塞上棉塞,置于37℃培养。 半固体培养基接种法 (1)用左手握住菌种管和半固体培养管,右手持接种针 (2)用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞,将管口通过火焰灭菌。 (3)用接种针伸入菌种管内,挑取用来接种的菌苔。 (4)垂直刺入半固体中心,至近管底部,然后沿穿刺线退出。 (5)塞回棉塞,接种针重新灭菌。接种完毕,于37℃培养18—24h,观察生长情况。 液体培养基接种法 (1)用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。 (2)在试管内壁与液面交界处轻轻研磨,使细菌均匀得散落在液体培养基中。 示教:细菌在培养基中的生长情况 In liquid medium On solid medium : In semisolid medium : 葡萄糖糖发酵试验 大肠埃希菌   产酸产气??? ????+                产碱杆菌    不发酵???? ?— 伤寒沙门菌 产酸不产气 + Indol试验 大肠杆菌   出现红色 + 肖氏沙门菌 不出现红色  - 硫化氢试验 大肠杆菌:不变色者为 阴性 变形杆菌:穿刺线部位呈黑褐色者 阳性 尿素分解试验 痢疾杆菌:不变色者为 阴性 变形杆菌: 红色 阳性 * 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 菌落 菌苔 1、3:有动力 2:无动力 *

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