CTC在肿瘤诊疗中的应用韩世强课件.ppt

肺癌ALK检测，CTC与组织的一致性为100% 更重要的是，这篇文章提到，大多数ALK重排的CTC都是间质型的 而我们看到，在使用CellSearch的检测时候，由于这种技术只能捕获上皮型的，所以检测到的CTC非常少，因此也就不能分析ALK基因情况； 而通过膜过滤能够分离到更多的CTC，因为是物理方法，上皮间质都能捕获； 这也反映了全面捕获所有CTC对基因检测准确性是非常重要的； * . 同样，乳腺癌HER2扩增检测，CTC与组织的一致性也很高，97% * . 9位患者，原发灶为HER2扩增阴性，疾病进展之后检测CTC发现HER2扩增阳性，对其中4位采取含赫赛汀治疗方案，3为患者的治疗效果都非常好； 这也意味着，我们可以在治疗过程中，通过CTC发现患者出现的一些新的基因信息，从而选取有针对性的治疗，提高治疗效果 * . . 对上面的内容进行回顾，可以得到一下结论 CTC对肿瘤疾病状态实时监测以及实时个体化治疗是非常有价值的 但是呢，要真正的将其应用，需要突破性的技术来对CTC进行全面分离，包括单个CTC和CTM，精准的分型，即上皮型CTC和间质型CTC，并与现有靶标检测技术解密结合，实现CTC基因的实时分析 所以，选择CTC检测技术很重要 * . 循环肿瘤细胞(CTC)在液体活检中的特殊意义 Circulating Tumor Cells 韩世强 Cancer Res. 2003;63: 3805-11. Breast Cancer Res. 2009;11:R46. Am J Pathol. 2011;178:989-96. 循环肿瘤细胞（CTC） 1869年 Aust Med J，Ashworth最早 在转移性癌症患者血液中观察到； 存在于外周循环的各类肿瘤细胞统称； 来自原发灶、转移灶或不明部位。 大多数CTC在外周血循环中会发生凋亡，只有少数CTC才能够形成转移 循环肿瘤细胞指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。 CTC形成、播散及转移的模式图 原发肿瘤血管生成侵润 侵入血管内 侵入血管外(CTC) 血管内增殖(CTM) 转移 转移 播散肿瘤细胞（DTC）微转移休眠灶 循环肿瘤细胞（CTC） 循环肿瘤微栓 （CTM） 凋亡的CTC 侵润 肿瘤细胞扩增 血管生成 上皮－间质转化 （EMT） 间质－上皮转化 （MET） 转移到骨髓和其他器官 “液态活检”的标记物 CTC ctDNA(cfDNA) 主要指来自于抗凝的外周血全血， 完整的肿瘤细胞 主要指来自于抗凝血外周血的血浆，片段化的DNA片段 一般认为来源于肿瘤原发灶/转移灶 肿瘤瘤细胞凋亡/坏死释放的DNA片段 活细胞，一般不宜长期保存 提取纯化后的核酸，可以保存 可以用于细胞学形态、结构分析；也可以分析细胞DNA、RNA、蛋白质等各类标志物 一般用于DNA突变监测、甲基化等DNA修饰相关分析 用于病情评价、预后判断，肿瘤早期诊断潜力不明确 用于个体化治疗，肿瘤早期诊断潜力相对明确 还有miRNAs，Peptides， Exosomes（外泌体），Secretomes（分泌物质组）等。 组织活检的局限性 很多肿瘤患者无法进行手术 穿刺受检者严重的不合适 穿刺自身的临床风险 某些肿瘤解剖位置不便进行穿刺 肿瘤的异质性 阿拉伯医生Albucasis （936-1013）及其发明的外科手术器械 Folia Histochem Cytobiol. 2009年47卷2期191-7页 　但我的一些病友只是定期做CT检查，并不抽血，是怎么回事呢？ 　如果您朋友的肿瘤对常见标志物都不敏感，那我就没办法抽血查肿瘤了，只能等肿瘤长到直径0.5 cm以上再借助CT或MRI检查发现。但等肿瘤长大到肉眼能看到时，治疗效果就很差了。 CTC“液体活检” Breast Cancer：N Engl J Med 351:781-791,2004 Prostate Cancer : Lancet Oncol 10:233-239, 2009 Colorectal Cancer: J Clin Oncol 26:3213-3221, 2008 获取CTC需要解决的技术问题 从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞 将恶性肿瘤细胞与红细胞、白细胞、正常上皮细胞、造血干细胞等区分开来 每10mL血液中可能仅含有几个到几十个循环肿瘤细胞，而10mL血液中含有的白细胞约有1亿个，红细胞有500亿个。 三种技术 过滤法 ISET: Isolation by Size of Epithelial Tumor cells 8μm孔径过滤膜，漏检体积较小的肿瘤细胞 敏感性低 梯度密度法 肿瘤细胞和单核细胞密度小于1.077g/ml CTC纯度低，混入较多