生物技术制药第2版-第5章-疫苗及其制备技术.pptVIP

一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine） （1）鸡胚 毒种传代和制备：来源于SPF（Specific pathogen Free）鸡群 疫苗生产：来源于封闭式房舍内饲养的健康鸡群、9-11日龄无畸形、血管清晰、活动 （2）毒种 WHO推荐并提供的甲型和乙型流感病毒株 一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine） 3. 单价原液的制备 病毒灭活（甲醛≤200μg/ml）、验证及内毒素含量测定 浓缩（超滤）、纯化（柱色谱法、蔗糖密度区带离心）及过滤除菌（硫柳汞） 单价原液保存（2-8℃） 三、重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine） 2. 种子批的建立及检定 符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定 建立：原始菌种传代 培养物纯度：无细菌和其他真菌检出 HBsAg基因序列测定 检定 质粒保有率：平板复制法 活菌率：血细胞计数板 抗原表达率：蛋白质含量、 HBsAg含量 保存：工作种子批-70℃保存，其余液氮保存 四、吸附破伤风疫苗（adsorbed tetanus vaccine） 2. 种子批的建立及检定 符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定 建立：原始菌种传代 培养特性：专性厌氧菌、培养观察 染色镜检：革兰氏染色 检定 生化反应：不发酵糖类、不还原硝酸盐等 产毒试验(小鼠皮下注射)：观察症状 特异性中和试验(小鼠皮下注射)：观察症状 保存：2-8℃ 五、治疗性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-T DENDREON公司的自体细胞免疫疗法 2010年批准上市，首个被FDA批准的治疗性癌症疫苗 五、治疗性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-T 基本步骤: 采集患者的外周血单个核细胞，培养生成抗原提呈细胞（树枝状细胞) 树枝状细胞在培养条件下用基因工程制备的融合蛋白（PA2024）孵育, 这种融合蛋白由两部分组成: 抗原-前列腺酸性磷酸酶（PAP），PAP能在95%的前列腺癌细胞中表达; 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF), 一种能帮助树枝状细胞成熟和激活的免疫信号因子 收集经融合蛋白孵育刺激的树枝状细胞等免疫活性细胞重新注入患者体内, 激发体内产生针对携带PAP抗原的前列腺癌细胞的抗肿瘤免疫反应 （四）菌种和毒种 血凝抑制实验 一种测定抗原或抗体的技术 血凝现象：有血凝素的病毒能凝集人或动物红细胞 血凝抑制试验：血凝现象被相应抗体抑制 单向免疫扩散试验 将一定量抗体混于琼脂凝胶中制成琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中，抗原扩散过程中与板中抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环 沉淀环直径或面积与抗原浓度呈正相关 用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，即定量检测未知标本的抗原浓度 酶联免疫吸附测定（ Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA ） 将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的反应 用于检测特异性抗原和抗体 特点：快速、灵敏、简便、载体易于标准化等 分类：间接法、夹心法、竞争法 抗酸染色涂片 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色 在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。 免疫印迹法（Western blotting ） 根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法 具有 SDS的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术 常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC） 以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 思考题 1. 简述疫苗的概念、组成及作用原理。 2. 简述各类疫苗的主要特点及制备