外周血循环肿瘤细胞检测技术进展课件.ppt

* . * . * . * . * . * . 外周血循环肿瘤细胞检测技术 主要内容 循环肿瘤细胞检测的意义 循环肿瘤细胞检测的基本原理 纳米材料技术在循环肿瘤细胞检测中的应用 微流控技术在循环肿瘤细胞检测中的应用 循环肿瘤细胞（circulating tumor cells, CTCs） 1896年Ashworth在患者外周血中发现与原发肿瘤细胞 体积和形态相似的细胞； 目前CTCs定义为自发或因诊疗操作脱离实体瘤原发灶或转移灶进入外周血循环的一类肿瘤细胞。 Ashworth TR. Aust Med J, 1869, 14: 146-147 Allard WJ, Matera J, Miller MC, et al. Clin Cancer Res, 2004, 10: 6897-6904 研究CTCs的临床意义 TNM分期的重要补充 疗效监测和预后判断 个体化治疗的指导 转移复发的早期预警 血循环转移的机制 TNM分期的重要补充 基于解剖学特点的TNM分期存在许多不足 CTCs可以做为TNM分期的重要补充 2007年CTCs被ASCO推荐做为肿瘤标志物 Pantel K, et al. Nat Rev Cancer. 2008. 8(5): 329-40 Harris L, et al. J Clin Oncol. 2007. 25(33): 5287-312 CTCs的临床意义 疗效监测和预后判断 CTCs可以直接提示癌症患者对治疗的反应 持续升高的CTCs提示肿瘤对治疗反应差 恶性肿瘤患者CTCs的出现均提示预后不良 治疗后CTCs出现与患者复发相关 Ignatiadis M, et al. J Clin Oncol. 2007. 25(33): 5194-202 Liu MC, et al. J Clin Oncol. 2009. 27(31): 5153-9 Rack BK, et al. J Clin Oncol. 2010. 28(15): 1003 Hayes DF, et al. Clin Cancer Res. 2006. 12(14 Pt 1): 4218-24 Cristofanilli M, et al. N Engl J Med. 2004. 351(8): 781-91 CTCs的临床意义 个体化治疗的指导 个体化治疗方案的制定根据病灶的生物学特性 转移灶的生物学特点与原发灶细胞存在差异 针对CTCs的分析有助于为临床治疗提供个体化信息 Stoecklein NH, et al. Int J Cancer. 2010. 126(3): 589-98 Alix-Panabieres C, et al. Clin Chem. 2013. 59(1): 110-8 Alix-Panabieres C, et al. Annu Rev Med. 2012. 63: 199-215 CTCs的临床意义 转移复发的早期预警 肿瘤转移是肿瘤发生发展的终末期，也是肿瘤病人死亡的主要原因 目前常规检测肿瘤转移的方法主要影像学方法 肿瘤转移的早期发生在细胞水平即便高分辨率的影像学方法也无法侦测 CTCs检测可为潜在的转移提供线索，为早期针对性治疗提供可能 Cristofanilli M, et al. JAMA. 2010. 303(11): 1092-3 Budd GT, et al. Clin Cancer Res. 2006. 12(21): 6403-9 CTCs的临床意义 血循环转移的机制 CTCs形成是血循环转移的必经步骤 具有何种生物学特性的细胞容易转移 Chaffer CL, et al. Science. 2011. 331(6024): 1559-64 Pantel K, et al. Trends Mol Med. 2010. 16(9): 398-406 CTCs的临床意义 CTCs特点 外周血含量低：1～10个CTC/mL血液﹠1 个CTC/109 个血细胞； CTCs特性、形态及细胞标志随着内环境改变而改变，无统一鉴定标准。 CTC的 检测步骤 检测 富集 以特异性抗体经抗原抗体吸附筛选 根据细胞大小进行富集 免疫细胞化学结合纳米材料 物理学 免疫学 免疫/化学 CTC富集方法 免疫磁性分离 阳性选择法 MACS、Cellsearch系统以及CTC-Chip 阴性排除法 CD45磁珠去除白细胞（IMB法） 抗原抗体吸附筛选 光镜下(放大倍数400倍)免疫磁珠吸附目标细胞 分子生物学方法(PCR) CTC 检测 免疫细胞化学方法(ICC、 EPISPOT) 流式细胞技术