常见的第二讲生物药物的质量管理与控制.ppt

根据电泳的分离特点，电泳法包括自由界面电泳、区 带电泳和高效毛细管电泳等。 根据所用支持物的不同分为纸电泳、醋酸纤维素薄膜 电泳、PAGE、SDS－PAGE 、琼脂糖凝胶电泳等。 自由界面电泳：在一根U形管的溶液中，同种分子 的构型及电荷情况基本一致，在电场的影响下，它们 逐渐密集而与其它电泳迁移率不同的物质之间形成明 显界面。 区带电泳：在电泳过程中，应用各种不同的惰性支 持介质，在电场作用下，使具有不同泳动速度的组 分形成各自区带的电泳。如纸电泳、醋酸纤维素薄 膜电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳等等。 高效毛细管电泳（HPCE）：在一根内径为50μm 的毛细管中，在高压电场下进行样品分离分析的一种 新型电泳技术。 常用电泳法的类型及其应用 纸电泳法：纸电泳法是用滤纸为支持载体的一种电 泳方法，如核苷酸，具有共轭双键的嘌呤或嘧啶碱基，在 一定的pH条件下，具有强的紫外吸收，电泳后在紫外灯下 显示紫色，定位、剪下相应的部位，进行洗脱，在特定波 长下测定A，按其吸收系数可计算核苷酸的含量。 醋酸纤维素薄膜电泳法：用醋酸纤维素薄膜作为支 持载体的一种电泳方法，已应用于血清蛋白、脂蛋 白等的分离和定量测定。 PAGE法：以人工合成的聚丙烯酰胺凝胶作为惰性支 持载体的电泳方法。其分离效果主要取决于分子所带 电荷与分子大小的比例，也取决于与分子量大小有关 的分子筛效应。按电泳槽和凝胶层中的缓冲液体系pH 和凝胶孔径大小是否一致分为连续体系和非连续体系。 SDS－PAGE：根据大多数蛋白都能与阳离子表面活 性剂SDS按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带 地负电荷远远超过天然蛋白分子的负电荷，消除了不 同蛋白分子的电荷效应，使蛋白分子相对迁移率的大 小完全取决于亚基分子量的高低，从已知分子量的标 准蛋白的对数荷相对迁移率所作标准曲线中求出供试 品的分子量。 琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖是D－和L－半乳糖残基通过α（1→ 3）和β（1→ 4） 糖苷键交替构成的线状聚合物。L－半乳糖残基在3和6位之间 形成脱水连接。琼脂糖链形成螺旋纤维，后者再聚合成半径20 －30nm的超螺旋结构。琼脂糖凝胶可构成一个直径从50nm到 略大于200nm的三维筛孔的通道。 琼脂糖凝胶电泳可以在很窄的范围内获得高纯度的某种DNA片段，或是大小相近的DNA片段。 核酸在溶液中由于它们有磷酸基团而带负电荷，在电场中向正极移动。在凝胶电泳中，DNA分子的迁移速度与分子量的对数值成反比关系。 垂直板电 泳装置 加样 样品迁移方向 电泳方向 混合样品 电泳 带孔胶 大分子 按分子大小分离 电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。 电泳缓冲液 加在槽中的经SDS处理的样品 夹在两块玻璃板之间的凝胶 电泳缓冲液 电源 电泳后的凝胶经考马斯亮篮染色、脱色后的凝胶照片 标准蛋白分子量 在一定的凝胶浓度下，多肽链分子量的对数与多肽链的相对迁移率成线性关系，所以可以通过标准曲线求未知多肽链分子量。 未知蛋白 3、理化检测法： 包括重量分析法、滴定分析法、分光光度法、高效液相 色谱法等。 4、生物检定法： 利用药物的生物体的作用以测定其效价和生物活性的一中方法。其应用范围包括如下几项： 生物检定法 生物检定法以药物的药理作用为基础，生物统计为工具，运用特定的实验设计，利用药物对生物体(整体动物、离体组织、微生物等)的作用以测定其效价或生物活性，它通过供试品与相应的标准品或对照品在一定条件下比较产生特定生物反应的剂量比例，来测得供试品的效价。 生物检定法的应用范围如下： (1)药物的效价测定：对一些采用理化方法不能测定含 量或理化测定不能反映临床生物活性的药物可用生物 检定法来测定。中国药典收载了胰岛素、肝素、绒毛 膜促性腺激素等。 (2)微量生理活性物质的测定：一些神经介质、激素等 微量生物活性物质，由于其很强的生理活性，在体内 的浓度很低，加上体液中各种物质的干扰，很难用理 化方法测定；而不少活性物质的生物测定法由于灵敏 度高、专一性强，对供试品稍作处理即可直接测定。 (3)某些有害杂质的限度检查：如内毒素等致热物质和 生化制剂中降压物质的限度检查等。 ⑴.凡例（General Notice）是解释和使用《中国药典》 正确进行质量检定的基本原则，并把与正文附录及 质量检定有关的共性的问题加以规定，避免在全书 中重复说明。 凡例中有关规定同样具有法定约束力。 温度以摄氏度（℃）表示 水浴温度 除另有规定外，均指98～