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(1)材料的选取:还原糖含量高,白色或近于白色,如苹果,梨,白萝卜。 (2)试剂:斐林试剂(现配现用) 甲液:0.1g/ml的NaOH溶液, 乙液:0.05g/ml的CuSO4溶液 (3)步骤: 样液制备(取材5g,加入石英砂和5ml水)→取样液2ml于试管中→加入新配制的斐林试剂1ml(甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴加热2min左右→观察颜色变化(浅蓝色→棕色→砖红色) 浅蓝色 水浴加热前后的颜色变化: 棕色 砖红色 2.蛋白质 + 双缩脲试剂 → 紫色 双缩脲试剂: A液:0.1g/mL的NaOH溶液 B液:0.01g/mL的CuSO4溶液 使用方法: 先加A液于样液中, 再加B液于样液中 蛋白质的鉴定原理: 蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应。 蛋白质分子中含有很多肽键,在碱性溶液(即A液可造成碱性环境)中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用,产生紫色络合物。 (1)选材:鸡蛋清(必须稀释) (2)试剂:双缩脲试剂 A液:0.1g/mL的NaOH溶液, B液:0.01g/mL的CuSO4溶液 (3)步骤: 试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL(造成碱性环境),摇匀→加双缩脲试剂B液4滴,摇匀→观察颜色变化(紫色) 注:①样液浓度不宜过高,以免实验后黏住试管壁,洗不干净。 ②B液不能过量,多余的B液会与A液反应成蓝色,而掩盖生成的紫色。 斐林试剂 双缩脲试剂 甲液 乙液 A液 B液 成分 鉴定物质 添加顺序方法 反应原理 反应条件 反应现象 比较斐林试剂和双缩脲试剂 0.1g/mL的NaOH溶液 0.1g/mL的NaOH溶液 0.01g/mL的CuSO4溶液 0.05g/mL的CuSO4溶液 还原性糖 蛋白质 甲液和乙液等量混合均匀后再加入 先加双缩脲试剂A液1mL,摇匀,再加双缩脲试剂B液4滴 50-65℃水浴加热 砖红色沉淀 紫色络合物 不需加热,摇匀即可 还原糖中的醛基被Cu(OH)2氧化, Cu(OH)2被还原成Cu2O 具有两个以上肽键的化合物在碱 性条件下与Cu2+反应生成络合物 3.脂肪+苏丹Ⅲ→橘黄色 脂肪+苏丹Ⅳ→红色 (1)材料的选取:含脂肪量越高的组织越好,如花生的子叶。 (2)步骤 ①取材: 取一粒浸泡过的花生种子,去掉种皮 ②制作徒手切片:(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央 ③染色:滴2~3滴苏丹Ⅲ染液在切片上→2~3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精(苏丹Ⅲ易溶于酒精中,避免影响实验结果) ④制作装片:滴1~2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片 ⑤镜检鉴定:光学显微镜对光→低倍镜寻找着色圆形小颗粒→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒 4、 用试管取2mL待测组织样液,向试管内滴加1~2滴碘液,观察颜色变化。 淀粉 + 碘→蓝色 加1~2滴碘液 鉴定物质 材料 试剂 现象 可溶性还原糖 梨 (避免颜色干扰) 脂肪 花生 蛋白质 豆浆 鸡蛋清 淀粉 马铃薯 生物组织中几种有机物的检测方法比较: 斐琳试剂 (甲液乙液混合使用) 砖红色沉淀(水浴加热) 苏丹Ⅲ 苏丹Ⅳ 橘黄色脂肪滴 红色脂肪滴 双缩脲试剂 (先加A液后加B液、 B液不能过量) 紫色 碘液 蓝色 例题: 1.可用于鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂( ) A.斐林试剂 B.双缩脲试剂 C.苏丹Ⅲ染液 D.苏丹Ⅳ染液 2.下列糖中能与斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是( ) A.淀粉 B.果糖 C.蔗糖 D.纤维素 3.下列哪个实验用到显微镜( ) A.可溶性还原糖的鉴定 B.蛋白质的鉴定 C.脂肪的鉴定 D.淀粉的鉴定 A C B 4.用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液颜色的变化过程为( ) A.无色一砖红色(沉淀) B.浅蓝色一砖红色(沉淀) C.浅蓝色一蓝色一砖红色(沉淀) D.浅蓝色一棕色一砖红色(沉淀) 5.下列物质中,能被苏丹IV染液染成红色的是( ) A.马铃薯块茎 B.浸软的蓖麻种子 C.蛋清液 D.苹果 D B 6.在鉴定可溶性还原糖的实验中,加入斐林试剂时必须要( ) A.先加入斐林试剂甲液,后加入乙液 B.先加入斐林试剂乙液,后加入甲液 C.将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后再加 D.以上A、B、C三种操作方法都正确 7.鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂的正确做法是 ( ) A.
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