细胞培养技术++培训学习课件版.ppt

细胞培养技术 细胞培养 概念：取动物组织，在体外，无菌条件下，模拟体内环境（营养、温度、pH值、气体），对其进行培养，使细胞能够生存、生长、保持原来生物学特性的一种实验方法。 内 容 细胞培养的基本条件 细胞培养基本实验 一、细胞培养的基本条件 实验室条件： 环境、设备、器材、试剂 实验操作者工作范畴： 无菌操作、温育、培养液配 置、洗刷、无菌处理、细胞和用品 储存等 back 实验室条件 无菌环境 仪器设备 普通器材 一般试剂 　 无菌室结构模式图 仪器设备 超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、液氮罐、低温冰箱、重蒸水装置、负压真空泵、普通冰箱、消毒锅、烤箱、水浴锅、天平等 back 二氧化碳培养箱 back 超净工作台 back 液 氮 罐 普通器材 玻璃瓶皿：玻璃瓶、培养瓶、培养 　　　　　　皿、吸管、离心管、抽 虑瓶等 塑料瓶皿：多孔培养板、培养皿、 　　　　　　培养瓶等 一般试剂 培养液 平衡盐液 消化液 抗生素液 pH调整液 back 培养液 使用培养液： 天然培养基 5-20% 合成培养基 80-95% 附加成分 再加适量抗生素液，调整pH值即可 back 天然培养基 小牛血清 胎牛血清 组织提取液 back 合成培养基 RPMI1640 Eagle培养液：DMEM、MEM、IMDM HamF12、HamF10、 PC199 Mc-Coy5A back 附加成分 促贴壁物：层粘连蛋白等 激素：胰岛素、氢化考的松、GH等 生长因子： ECGF、NGF、FGF等 酶抑制物：大豆胰旦白酶抑制剂等 back 平衡盐液 Hanks D-Hanks Earle PBS HBSS back 消化液 胰蛋白酶 (0.125 -0.25%) 胶原酶 (0.1-0.3mg/ml) EDTA (0.01 -0.02%) back 抗生素液 链霉素 (100ug/ml) 青霉素 (100单位/ml) 制霉菌素 (100单位/ml) 终浓度不超过万分之一为宜 back pH调整液 5.6%NaHCO2 HEPES 1NHCL 10%HAC 1NNaOH back 无菌操作 洗手 着装 近火焰操作 试剂瓶等斜放 实验前准备 清洗： 玻璃、塑料、橡胶、金属类等 消毒： 无菌室、培养用液、培养器皿（玻璃、塑料、