实验二-影响酶促反应因素.pptVIP

实验二温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响及特异性 一、实验目的 1．通过实验，观察温度、pH值、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响。 2．能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析。 二、实验原理 利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、pH、激动剂和抑制剂对酶的活性影响。 淀粉 糊精 麦芽糖和葡萄糖 蓝色 碘 紫色→红色→无色 无色 碘 碘 ＋ ＋ ＋ ↓ ↓ ↓ 二、实验原理 在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适温度在37℃左右。温度过高，酶变性失活，酶促反应速度下降，甚至停止。 每种酶都有最适的pH值，在最适pH值时，酶的活性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适pH均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最适pH值为6.8。 氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液淀粉酶有抑制作用。 三、实验材料 1.1%淀粉溶液 取可溶性淀粉1g, 加5ml蒸馏水, 调成糊状, 再加80ml蒸馏水, 加热并不断搅拌, 使其充分溶解, 放冷, 最后用蒸馏水稀释至100ml。 2.pH3.0缓冲液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液205ml，0.1mol/L柠檬酸溶液795ml, 混合即成. 3.pH6.8缓冲液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液772ml，0.1mol/L柠檬酸溶液228ml, 混合即成. 4.pH8.0缓冲液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液972ml，0.1mol/L柠檬酸溶液28ml混合即成. 5.0.9%NaCl溶液 6.1% CuSO4溶液 7.碘液 9.试管架 11.试管夹 12.滴管 13.白瓷板 14.恒温水浴箱 15.电炉 16.烧杯 【注意事项】 1.注意实验器材的干净，避免杂质影响反应结果 2.各管反应时间应严格控制，保证一致。 四、实验方法 稀释唾液制备 用水漱口，含蒸馏水咀嚼2分钟后，把唾液吐进烧杯中备用。（注：唾液淀粉酶活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应太快，则减少稀释唾液的用量） 煮沸唾液的制备 取上述唾液约5ml，放入沸水中煮沸5分钟，取出备用。 （一）温度对酶促反应速度的影响 管 号 1 2 3 缓冲液（pH6.8） 20滴 20滴 20滴 1%淀粉溶液 10滴 10滴 10滴 把三支管溶液摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴预温 预温温度 0℃ 37℃ 37℃ 预温5分钟后取出，继续向各管加入相应唾液 稀释唾液 10滴 10滴 — 煮沸唾液 — — 10滴 把三支管摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴10分钟，加碘2滴 水浴温度 0℃ 37℃ 37℃ 结果与分析 取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液1滴，摇匀观察颜色变化(切记勿摇动)。摇匀再观察。 （二）pH对酶促反应速度的影响 管号 1 2 3 1%淀粉溶液 10滴 10滴 10滴 pH5.0缓冲液 10滴 — — pH6.8缓冲液 10滴 — pH8.0缓冲液 — — 10滴 稀释唾液 5滴 5滴 5滴 把三支管摇匀，然后放至 37℃水浴10分钟，加碘2滴摇匀 结果与分析 将各管混匀，放进37℃水浴箱中保温。 取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液1滴，摇匀观察颜色变化。 （三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响 管号 1 2 3 4 1%淀粉溶液 10滴 10滴 10滴 10滴 pH6.8缓冲液 10滴 10滴 10滴 10滴 蒸馏水 2滴 — — — 氯化钠溶液 — 2滴 — — CuSO4溶液 — — 2滴 — Na2SO4溶液 — — — 2滴 稀释唾液 5滴 5滴 5滴 5滴 把三支管摇匀，然后放至 37℃水浴10分钟，加碘2滴摇匀 结果与分析 将各管摇匀，放进37℃水浴箱中保温。取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至