《结核病痰涂片及质量保证》.ppt

结核病痰涂片检查及质量保证 一、痰涂片检查 （一）结核病细菌实验室布局原则 1、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得与其他实验室混用，最好为P3级实验室； 2、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与涂片镜检、培养前处理、药敏试验等污染操作要有独立分开的场所，最好分别在专用的房间进行； 3、基层只从事涂片镜检的实验室只拥有一间独立房舍的情况下，相对洁净区（镜检区、登记区）与污染区（涂片、染色区）要有明显区分。 （二）痰标本的收集和运送 干酪痰、血痰或粘液痰为合格标本，量应为3-5毫升。 难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但应注明标本性状，以供分析结果时参考。 收集标本的容器应采用国家参比室推荐的标准痰瓶，或采用直径4厘米、高2厘米的广口塑料（或蜡纸）的或密闭容器。 容器上应注明与检验单一致的病人姓名、编号及日期。 需送上一级实验室检查的痰标本应置4℃冰箱保存，外送前认真核对检验单与痰瓶上标注，放专用的冰盒内运送，或用纸袋、塑料袋封扎牢后顺序放入包装盒，盒外注明请勿倒置标志。 （三）痰涂片操作流程及显微镜检报告方式 直接涂片法操作流程： 1、涂痰膜（大小10×20㎜），自然干燥 2、复红加热初染5分钟 3、流水冲洗 4、盐酸酒精脱色3分钟(必要时重复脱色，但不要过度） 5、流水冲洗 6、美兰复染30秒 7、流水冲洗 8、自然干燥，镜检 显微镜检报告方式： 0条/300视野：萋-尼氏抗酸杆菌阴性 1-8条/300视野：实报菌数并重检 3-9条/100视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（+） 1-9条/10视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（2+） 1-9条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（3+） ≥ 10条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（4+） （四）细菌学常规检查的注意事项 选择痰标本中脓性、血样、干酪样的部分涂片阳性率较高； 一张玻片只涂一份标本，玻片一次性使用，防止交叉污染； 打开痰盒、涂抹痰膜、烧灼接种环时容易产生气溶胶，应注意正确操作和自身防护； 石炭酸复红初染时必须加温。 常见误差原因见下表 (六)废弃标本和污染物的处理 废弃标本、痰盒和污染物均须经高压蒸汽灭菌后方能丢弃或清洗； 如需焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。焚化不彻底或暴露焚烧是危险的； 专业处理： 试验操作工作面应以3%石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭，再用紫外线灭菌灯照射30分钟。 二、痰涂片镜检的实验室质量保证 按照世界卫生组织（World Health Organization)和国家结核病防治规划(Nationaltuberculosis programme）的要求，在我国已全面推行DOTS策略或DOTS策略得到良好的贯彻执行的地区，为了持续提高结核病实验室痰涂片检查的工作效率和可靠性，必须建立我国结核病实验室质量保证系统网络。在实验室内部质量控制的基础上，应用实验室间质量检查和评估的方法，进行实验室检查系统的评价，并通过采用一系列措施改进和不断提高实验室业务总体水平。 （一）室内质量控制 室内质量控制(Quality Control,QC)指实验室内部的操作规程、设备和耗材、痰标本收集、染色剂制备、涂片制备和染色、显微镜维护、显微镜镜检、结果登记和报告、以及痰片保存等整个过程的内部检查和监测。 1、痰标本的收集 （1）容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本（参考规格：直径4厘米，高度2厘米）。痰容器应标明病人姓名、日期、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）和容器序号1、2、3（1=当日即时痰，2=夜间痰，3=次日晨痰）。 （2）痰标本性质：干酷痰、血痰、粘液痰为合格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。 （3）初诊病人应收集3份痰标本（当日即时痰、夜间痰或次日晨痰），治疗中或复诊随访病人按期每次收集2份痰标本（当日即时痰、当日痰或次日晨痰）。 （4）对当日不能进行涂片检查的痰标本，须置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。 2、抗酸染色液制备 （1）有染色液制备配方和配制纪录。 （2）染色液试剂瓶须标明染色液名称、浓度和制备时间。 （3）染色液置于棕色瓶内存放，避光保存。 3、载玻片 （1）新载玻片应经95%乙醇脱脂，检查无划痕后，方可使用。 （2）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。 （3）载玻片只允许一次性使用，严禁清洗后重复使用。 （4）载玻片只允许左侧1/3处标注实验室序号。 （5）载玻片正面右侧2/3中央处均匀涂抹成面积为10× 20mm的卵圆形痰膜。 4、染色 （1）肉眼观察染色后的痰膜应呈均匀亮蓝色，无红色斑块。 （2）将染色后的玻片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明该玻片涂抹过厚。 （3）染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂抹面积的10