HPL常见问题.doc

HPLC常见问题和对策一对实验人员十分有用 HPLC色谱常见问题 用HPLC进行分析时保贸时间有时发生漂移，有时 发生快速变化，原因何在？如何解决？ 液相色谱中峰fli现拖尾或fli现双峰的原因足什么？ HPLC灵敏度不够的主耍原囚及解决办法 做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解 决？ 我域近更换丫另一种牌号的ODS柱，虽然分离情 况仍可以，但保留时间不重现，为什么？ 我购买的HPLC柱验收测试时柱压过髙，请问为什 么？ 色谱双峰产屯的可能及判断和处理 色谱柱中的流动相会排干呵？ 使用 PEEK (polyetheretherketone)管路和接头需变 注意什么问题？ 液相色谱梯度洗脱中柱温的影响有那些？ 为何基线会漂移 规则的基线噪音是如何产生的 不规则的基线噪音是如何产生的 保留时间漂移的故障排除 力何出现肩峰或分叉？ 为何出现鬼峰？ 为何出现峰拖尾？ 为何出现峰展宽? 除丫流速外，还有哪些因尜能引起压力改变？ 什么是强溶剂、弱溶剂？ 怎样冰会使峰位发生重排？ 除丫在线脱气常用的实验室脱气人式还冇哪些？ 评价一个色谱柱的蝻基本指标有那些？ 什么是时间常数？ 力什么在实验过程中有时会出现倒峰？ 为何会出现“胖”峰和平头峰？怎样避免？ 什么是次级保衔效应？ 前延峰的发生及处理？ 峰变宽的原因？ 柱下?衡慢的常见原因仓哪些？ 用内柚法实验时对内称物的要求有哪些？ 管子切割与安装注意祺项？ 什么是HPLC的“无限直径效应”？ 如何评价一台检测器？ 如何简单判断比例阀是否内漏？ 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时 发生快速变化，原因何在？如何解决？ 欠丁漂移问题： 温度控制不好，解决A法足采用恒温装置， 保持柱温恒定 流动相发生变化，解决办法足防止流动相发 生蒸发、反应等 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平 衡 欠丁?快速变化问题 流速发生变化，解决办法足重新设定流速， 使之保持稳定 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 流动相不合适，解决办法力改换流动相或使 流动相在控制室内进行适当浞合 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什 么？ 筛板堵塞或柱失效，解决办法足反向冲洗柱 子，替换筛板或更换柱子。 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子， 改换流动相或更换选择性好的柱子 5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情 ③可能柱超载，减少进样量。 况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？ 这足因为被分析物可能具冇形成氢键的能力。尽 管过去几年來，填料的制造技术有了极人的提髙，但 3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正 ①样品量不足，解决办法为增加样品量 足这些硅醇基可能与样品发生相互作川。凶此，同一 ②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性 被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱卜.的相对 质改变流动相或柱子 保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物， ③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调 如三乙基胺（TEA）,将会使硅醇基的成键能力饱和， 整波忪或改换检测器 从而能保证不同牌号柱子卜.的相对保留时间具冇较 ④检测器衰减太多。调整衰减即可。 好的重现性。 ⑤检测器时间常数太人。解决办法力降低时间 如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性耍 参数 求，就不必保留时间的重现。 ⑥检测器池窗污染。解决办法力清洗池窗。 ⑦检测池中冇气泡。解决办法力排气。 ⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什 ⑨流动相流量不合适。调整流速即可。 么？ ⑩检测器与记录仪超出校iEilh线。解决办法力 柱压过髙足HPLC柱用户敁常碰到的问题。其原 检斉记录仪与检测器，重作校正Ilh线。 因有多方面，而且常常并不足柱子木身的问题，您可 按下面步骤检斉问题的起因。 ①拆去保护预柱，看柱压足否还髙，否则足保 4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解护柱的问题，若柱压仍髙，再检斉; 决？ ②把色谱柱从仪器卜.取下，看压力足否下降， ①泵内有空气，解决的办法足清除泵内空气， 否则足管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检斉； 对溶剂进行脱气处理； ③将柱子的进出口反过來接在仪器卜.，用10倍 ②比例阀失效，更换比例阀即可； 柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不耍连接检测器， ③泵密封垫损坏，更换密封垫即可； 以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下 ④溶剂中的气泡，解决的办法足对溶剂脱气， 降，再检斉；只用子使川过的柱子。 必耍时改变脱气人法； ④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的 ⑤系统检漏，找出漏点，密封即可； 溶剂或样品含冇颗粒杂质，正足这些杂质将筛板堵塞 ⑥梯度洗脱，这时压力波动足正常的。 引起压力卜.升。若