Nth1、Nth2、Nth3跨膜受体蛋白在淋巴瘤组织中的表达及意义.doc

Notchl、Notch2、Notch3跨膜受体蛋白在淋巴瘤组织中的表迗及意义 ［ ］目的探讨不同类型淋巴瘤组织中Notchl、 Notch2、Notch3跨膜受体蛋白的表迗规律。方法通过免 疫组织化学SP技术，观察59例淋巴瘤组织和21例淋巴结 反应性增生组织中Notch的表达水平。结果Notchl在T细 胞澈巴瘤组和NK/T细胞淋巴瘤组表迗的阳性率显著高于B 细胞淋巴瘤组及对照组，差异有统计学意义（P 细胞淋巴瘤组及对照组，差异有统计学意义（P 因此 深入探讨淋巴瘤的发病机制，寻找新的治疗靶点已成为研究 热点。很多研究发现Notch信号通路不仅在多器官及细胞的 正常发育中发挥重要作用，其异常表达亦与一系列肿瘤的发 生、发展密切相关，本研究主要检测Notchl?3受体蛋白在 淋巴瘤组织中的表达，进而发现规律，探讨其在淋巴瘤发病 中的作用。 1材料与方法 1标本及来源 收集泰安市中心医院2008年8月?2014年8月的新发 非霍奇金淋巴瘤的病理组织标本共59例，所有组织经泰安 市中心医院病理科专家划分组织学类型，提出病理诊断。其 中B细胞淋巴瘤39例（弥漫大B细胞淋巴瘤23例，滤泡性 淋巴瘤5例，小淋巴细胞淋巴瘤5例，黏膜相关淋巴组织结 外边缘区B细胞淋巴瘤6例），T细胞淋巴瘤12例（包括血 管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤2例，间变性大细胞淋巴瘤3 例，外周T细胞淋巴瘤7例），NK/T细胞淋巴瘤（鼻型）8 例。59例患者中男33例，女26例；中位年龄54. 35岁（最 小6岁，最大82岁）。同时收集21例淋巴结反应性增生的 组织标本作为对照组。所有病例均为初发，未经任何抗肿瘤 治疗及免疫治疗等。 1.2主要试剂 路膜受体蛋白Notchl抗体、跨膜受体蛋白Notch2抗体、 跨膜受体蛋白Notch3抗体均购自上海安研商贸有限公司， SP免疫组化检测试剂盒及浓缩型DAB染色试剂盒均购自福州 迈新生物公司。 1. 3方法 所有组织标本经4%甲醛溶液固定送病理科进行脱水、石 蜡包埋、切片，然后采用免疫组织化学SP染色法进行染色。 首先，切片置于60°C烘箱中烘烤过夜后经二甲苯脱蜡和梯度 酒精（浓度递减）水化，经PBS冲洗后将切片再浸入枸橼酸 缓冲液进行高温抗原修复，PBS冲洗；将3%H202溶液滴到切 片上，室温避光孵育20min，用以灭活内源性过氧化物酶； 向组织切片滴加正常非免疫动物血清进行抗原封闭；滴加一 抗（100倍稀释），4°C过夜，复温后滴加二抗、三抗，再滴 加DAB显色液；苏木精复染后，经1%盐酸酒精分化，梯度酒 精（浓度递增）脱水，二甲苯透明，干燥后中性树胶封片， 显微镜下观察结果。用已知阳性标本作为阳性对照，PBS代 替一抗作为阴性对照。 1.4结果判定 Notchl?3受体蛋白细胞染色判断标准 ［2］，染 色随机取5个高倍（X400）视野，观察染色阳性细胞百分 数及染色程度。染色细胞数占细胞总数的百分数：彡5%为0 分，6%?25%为1分，26%?50%为2分，彡51%为3分。染色 强度：未着色为0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，深 棕黄色及棕褐色为3分。染色细胞占细胞总数的百分数乘以 染色强度，通过得分判断结果，0分和1分视为阴性，2分 以上为阳性。 5统计学分析 采用SPSS19.0统计学软件进行数据处理。4X2表整体 进行Fisher精确检验，P0. 05）； B细胞淋巴瘤组和对照组的 Notchl蛋白表迗水平比较差异无统计学意义（P〉0.05）。 表2 Notchl蛋白在不同病理类型中阳性率的两两比较 注：#表示连续性校正x2值，*表示差异有统计学意义 3 Notch2蛋白在不同病理类型中阳性率的两两比较 Notch2受体蛋白阳性表迗率与淋巴瘤病理类型的相关 性分析，见表3。Notch2蛋白在T细胞淋巴瘤组、NK/T细胞 淋巴瘤组、B细胞淋巴瘤组及对照组的阳性率分别为8. 33% (1/12)、62.50% (5/8)、58. 97% (23/39)和 4. 76% (1/21)， B细胞淋巴瘤组和NK/T细胞淋巴瘤组Notch2受体蛋白阳性 率明显高于T细胞淋巴瘤组和对照组，差异有统计学意义 (P0. 05)。T细胞淋巴瘤组与对照组的Notch2蛋白表迗水平 比较差异无统计学意义(P〉0.05)。 表3 Notch2蛋白在不同病理类型中阳性率的两两比较 注：#表示连续性校正x2值，*表示差异有统计学意义 2.4 Notch3蛋白在不同病理类型中阳性率的两两比较 Notch3受体蛋白阳性表达率与淋巴瘤病理类型的相关 性分析，见表4。Notch3蛋白在T细胞淋巴瘤组、NK/T细胞淋巴瘤组、B细胞淋巴瘤组和对照组的阳性率分别为16. 67%(2/12)、 62.50% (5/8)、 5.13% (2/39)