HPLMS法检测人泪液中葡萄糖含量方法学研究.doc

HPLC-MS法检测人泪液中葡萄糖含量方法学研宄 袁艳娟1何学军2邵卿1刘晶1乔红群1 (1南京工业大学/江苏省药物研究所/江苏省药物安全性评价中心江苏南京 210009) (2南京工业大学江苏南京210009) 】建立了人泪液中葡萄糖含量的HPLC-MS测定方法。色谱柱为Waters XbridgeAmind 柱(2.1times;100mm, 3.5micro;m),流动相为 0.1%甲酸-乙腈 (15： 85),柱温：20°C；流速：0.2ml/min,进样量20mu;l。葡萄糖浓度在 lmu;g/ml?40mu;g/ml范围内与峰面积有良好的线性关系，定量限为 lmu;g/mlo釆用液质联用法检测人泪液中葡萄糖含量，该法专属性强，方法简 单，结果可靠。 关键词】泪液葡萄糖HPLC-MS 】R446 】A 】2095-1752 (2013) 08-0118-02 Determination of the concentration of Tear Glucose by HPLC-MS YUAN Yan-juanl, HE Xue-jun2 , SHAO Qinl,UU Jinl, QIAO Hong-qun*l (1. Nanjing University Of Technology Jiangsu Provincial Institute of Material Medica, JiangSu Center For Safety Evaluation Of Drugs Nanjing 210009 China 2. Nanjing University Of Technology Nanjing 210009 China,) Abstract】 Determination of the concentration of tear glucose was established by HPLC-MS. Waters Xbridge Amind (2.1times;100mm, 3.5micro;m) column was used, 0.1% Formic acid - acetonitrile as mobile phase, column temperature: 20 °C; flow rate: 0.2ml/min; injection volume 20mu;l. Peak area of glucose was in a good linear correlation with injection quanlity within the range of lmu;g/ml? 40mu;g/mlo The limit of quantification was lmu;g/ml. This method used for the determination of the concentration of tear glucose was specificity, simple and reliable. Keywords】 Tear Glucose HPLC-MS 糖尿病是一组内分泌代谢疾病，以高血糖为其主要标志。可伴发各种慢 性并发症。糖尿病患者在持续高血糖或血糖不稳定状态下可导致其唾液、泪液等 体液中糖含量发生改变。0前临床上通常把检测血糖做为诊断糖屎病的方法之一, 但血糖易受多种因素影响，且糖尿病患者的血糖水平极不稳定。而泪糖测定在统 一采集方法的前提下，影响因素较少，并且有敏感性高、无损伤、标本来源方便、 操作简单及泪糖含量较恒定等优点［1】。正常人泪液中含有一定量的葡萄糖，为 0.14 士 0.07 mmol/L,糖尿病人泪糖含量较正常人高为0.32 士 0.18 mmol/L即在 25mu;g/ml 以上［2】。 目前检测泪糖的方法有多种，March等［3］首先报道研制出可用于临床 的用于检测泪糖的角膜接触镜，通过角膜接触镜上荧光的强弱来了解泪糖的情况， 当泪糖升高吋，角膜接触镜上的荧光信号会增强，但是它并不能反应泪糖的具体 数值。Badugu等［4］研制出?一种无色的角膜接触镜，当含冇荧光闭的硼酸与泪液 中的葡萄糖发生反应吋，可出现荧光反应，通过分光光度计测量吸收值可以了解泪 液中葡萄糖含量。但是这些方法都比较复杂，本文探讨了采用HPLC-MS法检测 人泪液中葡萄糖含量的方法。 1实验部分 1.1仪器与试剂 Waters Quattro Micro三重四级杆质谱仪（电喷雾离子化接口），Waters 2695液相色谱仪（沃特斯中国有限公司），含在线真空脱气机、四元梯度泵、恒 温自动进样器、柱温箱。工作站：MaSSlynx4.0数据分析系统。 D-无水葡萄糖对照品（110833-