《谷胱甘肽发酵条件的优化扩大及其分离纯化》-毕业论文.doc

PAGE PAGE 精品 湖 北 工 业 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE I 分类号 密 级 UDC 学校代码 XXXX 硕士学位论文 题 目： 谷胱甘肽发酵条件的优化扩大及其分离纯化 英文题目： The Optimization and Amplification of Fermentation Conditions of Glutathione and its Separation and Purification 学位申请人姓名：XXX 申请学位学科专业：发酵工程 指导教师姓名：XXX XXX教授 PAGE 精品 摘 要 谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽化合物，具有清除自由基、解毒、抑制衰老、预防糖尿病和癌症、抑制艾滋病毒、提高人体免疫力等重要生理功能，在医学、食品、化妆品等领域具有广泛的市场前景。现有GSH生产能力远不能满足市场需求，所以采用GSH高产菌株发酵廉价原料转化为GSH，建立适合工业化分离纯化GSH的方法会带来巨大的社会和经济效益。 本文以富含GSH的啤酒酵母Y-14为材料，分别从以下四个方面进行研究： (1) 利用Plackett-Burman 试验设计、Box-Behnken试验设计法对啤酒酵母Y-14产GSH培养基进行优化，得到的最适培养基配方为: 葡萄糖20g/L，酵母膏10g/L，(NH4)2SO4 8g/L，KH2PO4 3g/L，MgSO4 0.15g/L。对优化结果进行验证试验，GSH产量可达到124.77mg/L。 (2) 利用单因素试验对啤酒酵母Y-14产GSH发酵条件进行研究，结果得到摇瓶最适发酵条件为培养温度30℃、初始pH6.0、摇床转速180rpm、摇瓶装液量30mL/300mL、补料培养基添加时间20h。在此条件下，菌体胞内GSH含量达到31.56mg/g，GSH的产量可达249.2mg/L，较原来提高了102%。 (3) 利用10L自动发酵罐补料培养啤酒酵母Y-14，①采用恒速流加单一葡萄糖培养基，20h时添加前体氨基酸和ATP的方法，测得GSH的产量在52h时，达到最大值243mg/L。②采用恒速流加全营养培养基，36h时添加补料培养基的方法，测得GSH产量在52h达到最大值520.742mg/L。比较发现，第二批发酵罐培养菌体干重、GSH产量较第一批分别提高了122.5%、114.2%。 (4) 采用D001大孔树脂粗分离GSH，得到最佳分离条件为：上样pH3.0，浓度为61.4mg/100mL，流速为0.5mL/min，洗杂质用液为无水乙醇，洗脱液为1.5% HCl + 0.3mol/L NaCl，流速为3mL/min。GSH的平均收得率为69.11%，蛋白质去除率为64.8%。然后通过SephadexG-10脱盐纯化GSH，得到最适条件：Φ1.6cm×25cm玻璃层析柱，上样浓度为116.66mg/100mL，上样体积为20mL。结果GSH的平均收得率为96.21%。最后SephadexG-10分级分离纯化GSH，采用Φ1.6cm×50cm玻璃层析柱，最适上样体积为2mL，GSH的平均收得率为99.26%，蛋白质去除率为56.5%。GSH浓缩倍数平均为9.07倍，纯化倍数为8.67倍。 关键词： 啤酒酵母Y-14，谷胱甘肽，发酵罐，D001大孔树脂，SephadexG-10 Abstract Glutathione (GSH) is a tripeptide formed by glutamic acid, cysteine and glycin, it has important physiological functions such as removing free radical, detoxification, anti-aging, diabetes and cancer prevention, inhibition of HIV and improve the effectiveness of the human immune system, and has a wide range of market prospects in the fields of medical, food and cosmetics. But the existing production capacity of GSH is far from the market demand.Use microbial