《果胶酶活性测定方法》》-毕业论文.docVIP

PAGE PAGE 1 本科学生毕业论文 题　目 基因工程菌-241脂肪酶酶学特性研究 姓　名　 学　号　 074120308 院、系　 生命科学学院 专　业　 生物技术 指导教师　 职称（学历） 讲师（硕士） 基因工程菌-241脂肪酶酶学特性研究 摘 要：本文主要介绍如何研究脂肪酶酶学特性，它广泛应用于工业生产。研究结果表明，脂肪酶的最适温度是45℃，温度的耐受时间是40min，最适PH是7，PH的耐受时间是60min，最适底物浓度是20%，金属离子对酶活性有一定的影响，有的促进或者抑制酶活性，最后用一个正交试验来确定了脂肪酶的最佳工业条件。 关键词：脂肪酶 ；性质；酶学特性 脂肪酶是一类具有多种催化功能的酶，可以催化 HYPERLINK /view/207415.htm \t _blank 三酰甘油酯及其他一些水不溶性酯类的 HYPERLINK /view/19501.htm \t _blank 水解、醇解、酯化、转酯化及酯类的逆向合成反应，除此之外还表现出其他一些酶的活性，如 HYPERLINK /view/3851489.htm \t _blank 磷脂酶、溶血磷脂酶、胆固醇酯酶、酰肽水解酶活性等(Hara；Schmid)。脂肪酶不同活性的发挥依赖于反应体系的特点，如在油水界面促进酯水解，而在有机相中可以酶促合成和酯交换。 脂肪酶的性质研究主要包括最适温度与pH、温度与pH稳定性、底物特异性等几个方面。迄今，已分离、纯化了大量的微生物脂肪酶，并研究了其性质，它们在分子量、最适pH、最适温度、pH和热稳定性、等电点和其他生化性质方面存在不同(Veeraragavan)等。总体而言，微生物脂肪酶具有比动植物脂肪酶更广的作用pH、作用温度范围，高稳定性和活性，对底物有特异性(Schmid；Kazlauskas)等。 酶是一种活性 HYPERLINK /view/15472.htm \t _blank 蛋白质。因此，一切对蛋白质活性有影响的因素都影响酶的活性。酶与底物作用的活性，受温度、pH值、酶液浓度、底物浓度、酶的激活剂或抑制剂等许多因素的影响。 脂肪酶的催化特性在于：在油水界面上其催化活力最大，早在1958年Sarda和Desnnelv 就发现了这一现象。溶于水的酶作用于不溶于水的底物，反应是在2个彼此分离的完全不同的相的界面上进行。这是脂肪酶区别于酯酶的一个特征。酯酶(E C)作用的底物是水溶性的，并且其最适底物是由短链脂肪酸(≤C8)形成的酯。 脂肪酶是类脂化合物分解、合成和酯交换的催化剂。具有高效、无毒等优点，自80年代以来，由于加酶洗涤剂工业、制革工业、生物柴油、纺织工业等领域的迫切要求脂肪酶引起了国内外学者的广泛兴趣，它被广泛应用于制革、生物柴油、纺织工业、造纸工业、制药工业、环保业、食品工业等领域，其中在国内加酶洗涤剂的年产量约50万吨。由此可见脂肪酶已经成为世界酶制剂市场上重要的品种，但是对于脂肪酶的工业最佳条件尚待研究，因此对脂肪酶学特性的研究，无论是在理论上还是在实践上都具有重要的意义。 脂肪酶是重要的工业 HYPERLINK /view/140300.htm \t _blank 酶制剂品种之一，可以催化解脂、酯交换、酯合成等反应，广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业。不同来源的脂肪酶具有不同的催化特点和催化活力。其中用于有机相合成的具有转酯化或酯化功能的脂肪酶的规模化生产对于 HYPERLINK /view/1244562.htm \t _blank 酶催化合成精细化学品和手性化合物有重要意义。 脂肪酶在微生物中有广泛的分布，其产生菌主要是 HYPERLINK /view/36020.htm \t _blank 霉菌和细菌。已经公布的适用于甘油三酯加工的不同来源的脂肪酶有33种，其中18种来自霉菌，7种来自细菌。 脂肪酶可将甘油酯（油、脂）水解，在不同阶段可释放出脂肪酸、甘油二酯、甘油单酯及甘油。水解生成的脂肪酸，可以用标准的碱溶液滴定，以滴定值表示 HYPERLINK /view/212797.htm \t _blank 酶活力。 材料与方法 实验材料、试剂与仪器 实验材料 脂肪酶，橄榄油，聚乙烯醇（PVA）。 实验试剂 1%酚酞，95%乙醇，NaOH溶液，脂肪酶液，柠檬酸缓冲液，甘氨酸缓冲液，各种含Na＋,K＋,Mg2+,Mn2+,Fe2+