一般肾功能试验.PPT

肾功能检查的方法学评价 测定血液中非蛋白氮成份是衡量肾功能的重要指标。 血液非蛋白成份：指除了蛋白以外的低分子量含氮化合物的总称，主要是尿素，约占50%左右，其它尚有尿酸（UA）、肌酐（Cr）、氨基酸(aa)、核苷酸、肽类及氨等。它们由蛋白分解而来，主要由肾脏排出。 方法 过去是测定NPN（非蛋白氮，non-protein nitrogen）的量，操作繁琐、结果分析复杂。 现在是测定尿素、 　Cr等肾功指标。 二、血清尿素（Urea）的测定 1、早期的生化方法测定尿素是用氮定量的方法，故临床上仍习惯将尿素测定称为尿素氮测定。每60克尿素含氮28克,1mmol/LBUN=1/2mmol/LUrea。 2、尿素来源：是体内氨基酸分解的终产物之一，由氨基酸生成NH3和CO2,主要在肝脏经鸟氨酸循环的代谢过程而逐步合成，经血液运输至肾、由尿液排出体外。全血值较血清值低，临床上常测血清标本。 3、单位：WHO推荐用mmol/L　Urea表示浓度。 血清尿素（Urea）测定的方法 直接法---二乙酰一肟法：WHO推荐的常规方法 间接法---尿素酶法（参考方法） 决定性方法---ID-MS （一）二乙酰一肟法 1、原理：尿素与二乙酰一肟在强酸溶液，经加热生成红色二嗪衍生物，称为Fearon氏反应，在540nm比色。 　　二乙酰一肟+H2O+H+　　　　　　双乙酰+羟胺 　　双乙酰+尿素+H+ 　　　　　　红色二嗪衍生物+2H2O 2、注意事项 ①羟胺是干扰物质，要用氧化剂除去，如过硫酸盐、砷酸、过氯酸、氯胺T以及一些阳离子。现在磷酸即做酸介质又作氧化剂。 ②加入氨基硫脲和Fe3+ （有氧化作用可以消除羟胺的干扰）或Cd2+（镉离子）可增加呈色的稳定性，提高反应灵敏度。 ③在呈色反应时，A要逐渐降低，30分钟内降低6%，1h降低12%，2h降低15%，所以宜在30分钟内比色。 3、评价 　　优点 ①WHO推荐的常规方法，简便快速精确 ②550nm波长比色最灵敏，且可摒除蛋白干扰，故标本无需作去蛋白处理 ③线性范围宽，达140mol/L ④干扰因素少：黄疸、溶血、BIL一般无影响 ⑤特异性较好：少量鸟氨酸循环的中间产物（瓜氨酸）等要干扰反应，但含量甚微，可认为无影响 缺点 ①特异性不如酶法 ②强酸有刺激性、腐蚀性 ③反应期间有臭味 （二）尿素酶法（脲酶法） 1、原理：先用尿素酶特异性地水解尿素，生成氨和CO2，再用一些方法来定量。 尿素+H2O　　　　2NH3+CO2 进一步可用以下方法定量： ①②③④ ①Berthelot氏反应（尿素酶-靛酚显色法、酚-次氯酸显色法、脲酶－波氏比色法）： 　原理： 　NH4++NaClO+2酚　　　吲哚酚+5NaCl+5H2O 吲哚酚：蓝色解离型（630nm） 催化剂：亚硝基铁氰化钠 评价：简便，专一性好灵敏度高、结果准确，批内CV2.7-3.9%，血清用量少（10μl即可），最终稀释度大，故不需要去蛋白。 参考值：2.86-8.2mmol/L ②尿素酶-纳氏试剂显色法 　碳酸铵+纳氏试剂+8NaOH →2[Hg2ONH2]I棕黄色沉淀+8KI+6NaI+NaCO3+6H2O ③尿素酶-谷氨酸脱氢酶法: α-酮戊二酸+NH4++NAD(P)H+H+ 反应要消耗NAD(P)H，340nm测A的减少，用终点法或速率法。 ④电化学方法 尿素由非离子化状态→NH4+，可用自动化电导仪测定导电率变化；或用NH4+ ISE来测定电位变化。 2、评价 优点：特异性强、灵敏度高、准确性好 要求： ①尿素酶是蛋白，故酸、碱、重金属均会破坏或影响其活性。 ②pH、温度、时间要严格掌握 ③防止环境中的NH3污染。 (①②为酶促反应的特点) 三、肌酐(Cr)的测定 肌酐是肌酸的代谢产物，由肾脏排出。血液中也有少量的肌酐，一般与BUN同时测定，用以了解肾功，两者比值(血清BUN mg/dl:血清Cr mg/ml)在正常情况下为12~20，计算比值可粗略判断肾性或肾外因素所致的氮质血症，还可测血与尿中肌酐，以计算肾小球滤过率。 方法： 决定法方法ID-MS、离子交换层析法， 参考方法： HPLC 常规方法：去蛋白苦味酸显色(Jaffe反应)法、 　　　　　　不去蛋白Jaffe拟一级动力学法(速率法) 　　　　　　酶法 (一)、苦味酸法(Jaffe氏反应) 1、原理： Jaffe于1886年报告的。肌酐与苦味酸在碱性介质中生成橙红色(510nm)的苦味酸肌酐复合物。 2、消除假肌酐干扰的方法： 　假肌酐：血浆中的葡萄糖、VitC、丙酮酸、蛋白质、乙酰乙酸、丙酮等均能与碱性苦味酸作用，生成红色化合物。在Jaffe氏反应中，约占总量的1/4，RBC内更高，故测定肌酐时一般用血浆或血清标本。