《H1N1SIV（猪流感病毒）HA蛋白的生物信息学分析、高效可溶表达及鉴别诊断SIV的夹心ELISA..doc

H1N1 SIV （猪流感病毒）HA蛋白的生物信息学分析、高效可溶表达及鉴别诊断S1V的夹心ELISA方法的建立 猪是流感病毒传播的中间宿主，猪感染猪流感病毒（SIV ）后 会导致其他疾病如蓝耳病、圆环病毒病、胸膜肺炎等疾病的发生，给 畜牧业造成巨大的经济损失，对人类健康造成了严重威胁。快速诊断 和及时监测是控制流感的首要步骤。H1N1亚型猪流感病毒（SIV） 的血凝素（HA）基因在流感病毒传染的过程中与识别靶细胞表面受体 在穿膜过程中起重要作用，刺激机体产生的中和抗体可以抵抗病毒感 染。本论文采用RT-PCR方法扩増了 H1N1亚型猪流感病毒（SIV ） 广东株的血凝素（HA ）基因，测序后对HA基因进行生物信息学分 析，分析结果表明HA蛋白具有良好的免疫原性，可以作为诊断试剂。 然后将HA基因克隆到高效可溶表达载体pBCX上，成功构建重组表 达质粒pBCX-HA。将其转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中表 达，SDS可检测到分子量约为94.0ku的融合蛋白，通过薄层 凝胶扫描分析表明表达产物占菌体总蛋白的29.5%。经蛋白可溶性分 析看出，融合蛋白90%以上是以可溶形式表达的。Western-blot证实， 可溶表达的融合蛋白与H1N1亚型猪流感病毒阳性血清具有良好的 免疫反应性。纯化表达的HA融合蛋白作包被抗原用于猪流感病毒单 克隆抗体的筛选，筛选到2株猪流感病毒针对HA蛋白表位的单克隆 抗体，?用制备的SIV单克隆抗体，建立了高特异性的检测H1N1亚型 SIV的间接ELISA方法，为猪流感的防控奠定基础。 关键词：H1N1亚型猪流感病毒血凝素（HA ） 生物信息学高效可溶表达单克隆抗体 ELISA方法 Biological information analysis and high soluble expression of HAprotein of H1N1 subtype Swine Influenza Virus along withestablishment of an ELISA assay to diagnose SIV Author : Xie ￥i-hcng r Li Dong , Su Pci-sui r Chen Chen-guo r Zhou Ke , Huang Hui-xiongDirector teacher: Xie Qing-mci associate professorCollege of Animal Science,South China Agric.Univ. , Guangzhou 510642,China Abstract : Swine is an intermediate of spreading influenza virus, swines infected influenza virus will bring on other diseases such as PRRS, PCV，APP .causing economic loses in the stockbreeding and intimidating the health of human so that fast diagnosis and timely analysis are the first step to control the influenza virus. The HA gene of H1N1 subtype influenza virus isolated from Guangdong Province was successfully amplified by RT-PCR，then analyzed biological information after translating DNA suquences And the HA fragment was inserted into plasmid pBCX to obtain recombinant plasimd in which HA gene was fused into. The pMBX-HA was transformd into E.coli BL-21(DE3) to induce HA gene fusion expression. The fusion protein band with relative molecular mass of 94000 was detected on the SDSgel，and the soluble expression products accounted for 29.5% of the total E.coli proteins. The sol