γIFN对增生性瘢痕中TGFβ影响的实验研究.doc

中国医科大学 硕士学位论文 瘢痕中TGF-P影响的实验研宄 姓名：唐明睿 H靑学位级别：硕士 专业：外科学 階导教师：薛宝升 2002.3.1 中文 —丄 刖 (瘢痕是组织进行修复后的产物，瘢痕一方面影响外观，瘢痕聋 缩述可以造成关节活动障碍，给人们生活带来极大不便。烧伤后 的瘢痕多为增生性，于创面愈合6个月后生长达到高峰。研究己 经证明，瘢痕的增生挛缩程度与很多因素有关，而主要是与瘢痕中 成纤维细胞不成比例增加，胶原的过度沉积有关。而许多细胞因 子对瘢痕的增生挛缩起到一定的作用，其中研究最多的是转化生 长因子B (TGF —p ),它可以通过各种作用促进瘢痕的增生 它的含量高低与瘢痕的增生程度直接成正比。而1干扰素 (1 I FN)却是一种对瘢痕增生起到负性作用的细胞因子，和 B的作用完全相反。了本实验通过细胞培养的方法观察一、/ I FNX 痕中TGF_B的影响，从而进一步证实其对瘢痕的抑制作用，: 寻找其存在这种作用时的合适浓度。 本实验选用于我院行瘢痕整形手术的病人共1 0例，其中男 例，女2例，平均年龄为3 2岁。患者瘢痕为伤后半年到2年，j 于正常皮肤，质地坚硬，无充血红肿及破溃，瘢痕自形成后未均采 取任何物理及化学治疗方法。术中将瘢痕切除后，将瘢痕组织保 存于低温冰箱中（一8 0。C），待实验时应用。 实验方法 将瘢痕组织进行消毒处理后，消化掉其中的其它成分，仅保留 其中的成纤维细胞进行原代培养，传一代后取相同数量的成纤维 细胞再次进行培养，而此时培养液中含有浓度不同的一/ I FN， 分别为 OU/ml，10U/ml，100U/ml 以及 1000U/ml.. 剂盒测出培养后的TGF—1 3数值，并对各组间数值进行统i 析，从中观察，，/ I FN是否对TGF一B存在抑制作用，同曰 作用的合适浓度。 实验结果 在实验结束后，对各组间数值进行方差统计分析，可以发现， 含一、/ IFNI OU/ml与OU/ml乙间，并没有统计学差异，而1 ( 组，1 0 0 0 U / m 1组与OU/ml组之间存在着明显统计学達 组数值问却不存在统计学差异。 瘢痕是皮肤不良修复以后的产物。瘢痕增生挛缩的程度和许 多因素有关，其中主要的是与胶原的代谢失衡有关。在增生性瘢 痕中，胶原合成明显增加，同时胶原酶含量减少，降解明显减慢。 III型胶原比例也有所上升。瘢痕挛缩程度则与肌成纤维细胞数量 的增加有着直接联系，另外，瘢痕的增生还与细胞外基质的变化有 着密切的联系。TGF—13正是在这些方面对瘢痕的增生挛缔 重要的作用。首先，它可以促进成纤维细胞数量的增加，还可以使 成纤维细胞分泌胶原的量增加，通过抑制胶原酶的作用来使胶原 華解速度减慢，从而对瘢痕的增生起到明显的促进作用。其次， rGF—8还可以诱导0 r .平滑肌肌动蛋白在成纤维细胞中的表J 岂成肌成纤维细胞数量明显增加，导致瘢痕挛缩。最后，TGF一 五可以通过刺激成纤维细胞产生细胞外基质，延缓其更新速度，使 交原降解减慢。在增生性瘢痕中，TGF一B的含量都有明显增高 中且它的含量与瘢痕的增生程度成正比。因此，TGF一B对瘢 的增生挛缩起着非常重要的作用，如果在瘢痕增生早期应用它的 和和抗体或者降低活性T G F — B水平，将是治疗瘢痕增生的关键。 1 FN是一种对瘢痕起到抑制作用的细胞因子。它对成纤维; 包的分裂增殖以及胶原合成都有一定抑制作用，同时还能减少胶 氧沉积。，，/ I FN同时能够减少瘢痕组织中肌成纤维细胞的数量， 而减轻瘢痕挛缩。在过度增生的瘢痕组织中，1 I FN的含量偏低 曲此可见，Y I ?1^和丁0?_?对增生性瘢痕有着几乎相反的1 权实验正是基于这种原因，观察啦F N对T G F —B的影响情况。 在本实验中，首先去处瘢痕中的其它成分，仅保留成纤维细胞 生行培养，传一代后，取基本等量的成纤维细胞再次进行培养，此 寸培养液中含有不同浓度的y I FN,观察培养后的TC_F_ ］从实验结果可以看出，含有5，IFN10U/ml与OU/m 34斤后P〉O. 0 5，统计学上并无明显差异，而含有5，IFN1 1 0 0 0 U / m 1组与0 U / m 1组相比，P 0 . 0 1，统计学上巧 苛这两组间P〉0. 0 5，也没有统计学差异。由此我们可以看!1 _00U/ml和100011/1111的/，/ IF N对增生性瘢痕中TGF 討亢作用，也正是由此对瘢痕的增生挛缩起到抑制作用，而这两种 良度之间的拮抗作用却没有差别，因此可以认为1 0 0 U/m 1的一 备这种作用的合适剂量一 . Y I FN是一种可以有效抑制增生性瘢痕中TGF — 细胞因子，从而进一步证实其对瘢痕增生以及挛缩的抑制作用。 在治疗瘢痕时可以起到明显的作用。 . 1 0 0 U