生物《实验》复习课件1(湖南师大附中)(精品·公开课件).ppt

* 高三生物专题复习 实验专题 第二讲 鉴定分离类实验 检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质 DNA的粗提取与鉴定 叶绿体中色素的提取和分离 检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质 一、实验原理： 1.可溶性还原糖＋斐林试剂?砖红色沉淀 2.脂肪＋苏丹Ⅲ　?　橘黄色 脂肪＋苏丹IV　?　红色 3.蛋白质＋双缩脲试剂?紫色反应 检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质 二、实验材料选用： 1.可溶性还原糖 含糖量较高，颜色较浅或近于白色的植物组织 2.脂肪的鉴定 　富含脂肪（植物油）的种子,如花生、核桃、蓖麻等的种子 3.蛋白质的鉴定 豆浆、鸡蛋清稀释液。 检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质 三、试剂 ： 1.斐林试剂 　A液 质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液 　B液　质量浓度为0.05g/mL的CuSO4溶液 　2.双缩脲试剂 　A液　质量浓度0.1g/mL的NaOH溶液 　B液　质量浓度0.01g/mL的CuSO4溶液 3.苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ 检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质 四.注意： 1.斐林试剂与双缩脲试剂的异同? （1）相同点: （2）不同点: 都由NaOH和CuSO4组成 用途不同 CuSO4溶液的浓度不同 使用原理不同 使用方法不同 颜色反应不同 检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质 四.注意： 2.反应过程中出现的颜色变化及其原因分别是什么？ 用斐林试剂鉴定还原性糖的实验 浅蓝色 ─ 棕色─砖红色（沉淀） 双缩脲试剂鉴定蛋白质的实验 无色─浅蓝色─紫色 检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质 四.注意： 3.使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3－4滴而不能过量？ 若加入过量的试剂B，CuSO4在碱性环境中生成大量的蓝色Cu(OH)2沉淀，会遮盖实验中所产生的紫色，影响观察的效果。 DNA的粗提取与鉴定 阅读教材p54-56 1.提取DNA的方法 2.以文字和箭头的形式表示DNA在不同NaCl中的溶解度，获得较纯的DNA的过程 DNA的粗提取与鉴定 一、提取DNA的方法: 1.DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。 2mol/L的NaCl溶液使DNA充分溶解,使杂质析出0.14mol/L的NaCl溶液使DNA析出,使杂质溶解。 DNA的粗提取与鉴定 一、提取DNA的方法: 2.DNA不溶于酒精.但细胞中的某些蛋白质溶于酒精.利用这一原理.可将DNA与蛋白质进一步分离. 3.DNA与杂质对酶、高温和洗涤剂的耐受性不同.蛋白酶能水解蛋白质,但对DNA没有影响.大多数蛋白质不能忍受60—80℃的高温,而DNA在80℃以上才会变性.洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没影响。 DNA的粗提取与鉴定 二、DNA的鉴定 在热水浴的条件下，DNA遇二苯胺会 被染成蓝色。 三、实验材料的选取 选用DNA含量相对较高的生物组织 DNA的粗提取与鉴定 四、实验的过程 1、破碎细胞，获取含DNA的滤液 植物细胞 动物细胞 方法 原理 细胞在低浓度溶液中吸水胀破 鸡血细胞液中加入蒸馏水,玻棒搅拌,过滤后收集滤液 洗涤剂瓦解细胞膜 切碎的洋葱中,加入洗涤剂和食盐搅拌、研磨,过滤后收集研磨液 DNA的粗提取与鉴定 四、实验的过程 1、破碎细胞，获取含DNA的滤液 2、去除滤液中的杂质 ①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。 ②DNA对酶的耐受性。 ③DNA对高温的耐受性。 DNA的粗提取与鉴定 →过滤含有DNA的氯化钠溶液 ①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。 滤液中加入2mol/L的NaCl溶液,溶解DNA →过滤除去不溶杂质 →加蒸馏水,调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA →滤取含DNA的粘稠物 →加2mol/L的NaCl溶液溶解DNA粘稠物 DNA的粗提取与鉴定 滤液中加入嫩肉粉，反应10—15分钟，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 ②DNA对酶的耐受性。 ③DNA对高温的耐受性。 滤液放入60—75℃的恒温水浴中保温，反应10—15分钟，使蛋白质沉淀而DNA分子未变性，再将DNA与蛋白质分离。 DNA的粗提取与鉴定 四、实验的过程 1、破碎细胞，获取含DNA的滤液 2、去除滤液中的杂质 3、DNA的析出与鉴定 在含有DNA的氯化钠溶液中，加入等量、冷却的95%酒精（溶解蛋白质等杂质），静置2—3分钟，溶液中出现白色丝状物，玻棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物。 小结：DNA的粗提取与鉴定