成年大鼠脊髓损伤后轴突生长导向因子Slit2的表达及Rho GTPases失衡对轴突再生性修复的抑制作用-外科学·骨外科学专业论文.docx

目 录 一、中文摘要································································································· Ⅰ 二、英文摘要································································································· Ⅷ 三、正 文 前 言 ·································································································· 1 第一部分 神经生长导向因子Slit2在成年SD大鼠急性脊髓损伤后 的表达和定位·································································· 7 第二部分 神经生长导向因子 Netrin-1 和 Slit2 在成年大鼠脊髓 损伤后的免疫荧光激光共聚焦扫描 27 第三部分 成年大鼠脊髓损伤后轴突再生过程中 Rho GTPases 的失衡性表达对生长锥延伸的影响 41 第四部分 Rho－ROK 通路的抑制对体外模拟脊髓缺血及再灌 注诱导的神经元损伤中的保护作用 61 四、总 结··································································································· 75 五、综 述··································································································· 76 六、附 录：读博期间发表的文章························································103 七、致 谢·································································································104 成年大鼠脊髓损伤后轴突生长导向因子 Slit2 的表达及 Rho GTPases 失衡对轴突再生性修复的抑制作用 中文摘要 第一部分 神经生长导向因子 Slit2 在成年大鼠急性脊髓 损伤后的表达和定位 目的： 观察轴突生长导向因子 Slit2 在成年大鼠急性外伤性脊髓损伤（traumatic spinal cord injury，SCI）后不同时间段表达量的变化和分布情况,探讨 Slit2 对成年大鼠 SCI 后轴突再生性修复中导向性延伸的可能机制和意义。 方法： 取成年 SD 大鼠 72 只，体重 200～250 克，雌雄不限，采用 Allen’s 打击法制作 SCI 模型，分别于损伤后第 2、4、7、14d 剖取损伤脊髓组织，应用半定量 RT-PCR 方法分析 Slit2 mRNA 表达水平变化，免疫组织化学法观察 Slit2 蛋白在损伤脊髓区 的分布情况，采用免疫荧光染色结合激光共聚焦扫描观察 Slit2 的表达和星形胶质细 胞增生之间的关系。 结果： 成年大鼠 SCI 后随着星形胶质细胞的增生，Slit2 mRNA 在脊髓损伤区的表达呈明 显升高趋势（P0.05）并于脊髓损伤后第 7 天达到峰值，光密度相对比值达到 0.725±0.005，之后则逐步下降； Slit2 蛋白阳性信号先后出现在急性 SCI 区灰质区星 形胶质细胞胞质中及神经元胞膜上，以前、后角及中央管周围较为聚集；免疫荧光 组织化学结合激光共聚焦扫描观察则发现随着星形胶质细胞的增生，损伤部位灰质 内出现星形胶质细胞标记物 GFAP 和 Slit2 在中线区域的共聚焦表达现象，提示 Slit2 由中线星形胶质细胞分泌并被运输到上述部位发挥作用。 结论： 成年大鼠 SCI 后随着星形胶质细胞的增生，脊髓损伤区内有 Slit2 表达一过性上 调现象出现并在损伤脊髓灰质内广泛分布，可能对 SCI 后的轴索再生性修复过程中 生长锥导向性延伸起到关键性的推斥性引导作用。 关键词： 轴突生长导向因子；Slit2；脊髓损伤；基因表达；免疫组织化学；免疫荧光激光 共聚焦扫描 第二部分 神经生长导向因子 Netrin-1 和 Slit2 在成年大鼠 脊髓损伤后的共表达 目的： 观察成年 SD 大鼠急性脊髓损伤后不同时间段 Netrin－1 和 Slit2 的共表达及分布 情况，探讨再生轴突所处微环境