丹酚酸A体内外代谢分析-药学专业论文.docx

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丹酚酸A体内外代谢分析-药学专业论文

万方数据 万方数据 烟台大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明: 所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工 作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体 已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已 在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文使用授权说明 本人完全了解烟台大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即:按照学校 要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存学位论文的印刷本和电子版, 并提供目录检索与阅览服务;学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保 存论文;在非必威体育官网网址的论文范围内,学校可以公布论文的部分或全部内容。 (必威体育官网网址论文在解密后遵守此规定) 论文作者签名: 导师签名: 日期: 年 月 日 摘要 本论文旨在通过一系列体内外手段,系统研究丹酚酸 A 的代谢特征,考察其 II 相结合代谢的种属差异,阐明其甲基-葡萄糖醛酸级联结合代谢机制,以及不同给药 途径的体内代谢一致性,并与母体化合物对照,评价其甲基结合代谢物的抗血小板 聚集活性。 实验方法如下:建立 SAA 与不同种属动物(人和大鼠)肝细胞亚组分体外共孵 育 II 相结合代谢体系,利用代谢产物生成速率或底物清除速率计算酶促代谢动力学 参数,通过代谢产物谱和酶促动力学参数对 SAA 体外 II 相结合代谢的种属差异进行 定性和定量表征。 根据不同孵育条件下级联代谢物生成速率,计算 SAA 的 II 相级联结合代谢的酶 促动力学参数,并与体内代谢产物谱进行比较,揭示 SAA 体内级联代谢途径及其机 制。 以健康大鼠为实验对象,考察 SAA 经口服和静脉注射两种不同途径给药在代谢 产物谱上的一致性;进一步通过与同时口服给予 COMT 酶抑制剂药物恩它卡朋和/ 或 UGTs 酶竞争剂布洛芬组动物血浆中原形药物暴露水平的比较,阐明 SAA 经口服 途径给药的体内代谢机制,以及与静脉注射给药途径的一致性。 利用体外制备的大鼠贫血小板和富血小板样本,以阳性药物阿司匹林和母体化 合物 SAA 为对照,根据抗血小板聚集活性的 IC50 值测定结果,对化学结构明确的四 种主要的 SAA 体内甲基结合代谢物抗血小板聚集活性进行定量评价和比较。 实验结果:体外温孵甲基结合代谢的酶促反应动力学研究结果显示,SAA 的甲 基结合代谢在代谢产物类别上不存在明显的种属差异,但受实验用人源肝 S9 的 COMT 酶活力偏低的影响,在人源肝 S9 共孵育体系中仅观察到两个单甲基结合产物 与鼠肝 S9 共孵育体系一致,另两个二甲基结合代谢物不明显。这一实验结果也进一 步提示,SAA 分子结构中 4 个间位酚羟基在体内 COMT 酶的介导下,经逐级甲基结 合代谢过程生成一系列单甲基、二甲基及三甲基结合代谢产物。SAA 在人和鼠源肝 S9 体系中体外甲基结合代谢的米氏常数 Km 分别为 0.105 mmol?L-1、0.51 mmol?L-1, I 最大反应速率 Vmax 分别为 0.096 nmol?mg-1?min-1、6.52 nmol?mg-1?min-1,表明 SAA 的 甲基结合代谢在底物与代谢酶的亲和力以及代谢速度上也存在明显的种属差异。人 肝 S9 中 COMT 酶对 SAA 的亲和力高于鼠源肝 S9,但甲基结合代谢的速率显著偏低, 可能与实验用人肝 S9 体系中的较低的蛋白浓度和 COMT 酶活力有关。 体外温孵葡萄糖醛酸结合代谢的酶促反应动力学研究结果显示,SAA 的葡萄糖 醛酸结合代谢在代谢产物类别上不存在明显的动物种属差异。SAA 在 HLM 和 RLM 体系中体外酶促葡萄糖醛酸结合代谢反应的米氏常数 Km 分别为 0.037 mmol?L-1、 0.585 mmol?L-1,最大反应速率 Vmax 为 0.065 nmol?mg-1?min-1、2.08 nmol?mg-1?min-1, 表明 SAA 的葡萄糖醛酸结合代谢在底物与代谢酶的亲和力以及代谢速度上均存在明 显的种属差异。HLM 中 UGTs 酶对 SAA 的亲和力高于 RLM,但其葡萄糖醛酸结合 代谢的速率显著偏低,可能与实验用人肝微粒体体系中较低的蛋白浓度和 UGTs 酶活 力有关。 体外温孵级联代谢研究结果显示,SAA 先发生葡萄糖醛酸结合后的甲基结合代 谢的 Km 和 Vmax 分别为 0.026 mmol?L-1、3.18 nmol?mg-1?min-1;SAA 先发生甲基结合 后的葡萄糖醛酸结合代谢的 Km 和 Vmax 分别为 0.015 mmol?L-1、1.34 nmol?mg-1?min-1, 通过酶促动力学参数的比较可知,SAA 在体内经过一

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