单克隆抗独特型抗体对PRRSV免疫反应的调控-预防兽医学专业论文.docx

山东农业大学硕士学位论文 山东农业大学硕士学位论文 单克隆抗独特型抗体对 单克隆抗独特型抗体对 PRRSV 免疫反应的调控 PAGE PAGE 1 PAGE PAGE 10 中文摘要 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪 繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）感 染所致的一种急性高度传染性疾病，该病主要引起妊娠母猪早产、流产、死胎、木乃伊 胎等繁殖障碍以及各年龄段猪的呼吸道症状和高死亡率。该病于 1987 年首先发现于美 国，随后波及多个国家和地区。我国 1991 年在台湾发现该病，郭宝清在 1996 年首次从 流产胎儿中分离到 PRRSV，证实了 PRRSV 在我国的存在。2006 年下半年的“无名高热” 疫情在我国南方大面积暴发，最后确诊为高致病性 PRRS。该病造成较高的发病率和死 亡率，而且临床症状逐渐复杂，流行范围逐渐扩大。目前 PRRS 已经遍及全球主要养猪 的国家和地区，给养猪业带来了极大的经济损失，也成为了世界各国科学家研究的热点。 我们前期的研究发现感染 PRRSV 猪的血清中存在两种不同的抗 GP5 和 M 蛋白的 自身抗独特型抗体（Auto-anti-idiotypic antibodies），它们对 PRRSV 感染后猪的免疫反 应网络可能起到正向或负向调控作用。为了探索抗独特型抗体对 PRRSV 免疫反应的调 控作用，本试验用 GP5 的抗独特型抗体 Mab2-5G2 及其单链抗体免疫小鼠后再免疫纯化 的 PRRSV 病毒，然后通过间接 ELISA 检测各种抗体水平和流式细胞术检测外周血中 CD4+/CD8+淋巴细胞的数量比例变化及血象分析来说明问题。因为有报道称不同剂量的 抗独特型抗体有着不同的调控作用，所以我们设计了不同的免疫剂量下的试验，并且同 时设置了无关抗体对照组。 通过对实验结果统计分析发现，抗独特型抗体 Mab2-5G2 及其 scFv 都可以增强小鼠 免疫系统对 PRRSV 的免疫反应，反映在可以提高体液免疫中 GP5 的抗体水平并且能显 著性的提高外周血中 CD4+和 CD8+T 细胞的比例，从而能够增强小鼠对 PRRSV 的免疫 能力。另外我们发现，不同剂量的抗独特型抗体及其 scFv 有不同的调控作用，在我们 所分的 3 个剂量梯度中，只有 0.25uM/鼠的剂量才可以增强小鼠外周血中 CD4+和 Cd8+T 淋巴细胞的比例及总淋巴细胞占外周血白细胞的比例，而 0.025uM/鼠和 1.0uM/鼠的免 疫剂量都可以显著性的降低 CD4+和 CD8+T 细胞的比例，从而可能消弱小鼠免疫系统对 PRRSV 的免疫能力。该研究证明了抗独特型抗体及其单链抗体对机体免疫系统的调控 受免疫剂量的影响，不同剂量可能产生正向或反向的调控。该研究结果给用抗独特型抗 体或其单链抗体作为免疫调节剂来提高猪对 PRRSV 的免疫力提供了依据。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征，抗独特型抗体，单链抗体，免疫调控 Abstract Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) is an acute infectious disease caused by Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV). PRRS mainly caused reproductive disorder, including of premature, abortion, fetal death, mummy and porcine respiratory syndrome at variety of ages and high mortality. The disease was first discovered in American in 1987 and then prevailed in many countries. In 1991, this disease was discovered in Taiwan. In 1996, Guo Baoqing first isolated a PRRSV strain from aborted fetuses and verified the evidence of PRRSV in our country. In 2006, there was a large outbreak in our South districts and this