多聚二磷酸腺苷核糖合成酶抑制PI3KAkt途径调节热休克蛋白70的机制研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 1 型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶抑制 PI3K/AKT 途径调节 热休克蛋白 70 的机制研究 摘 要 目的：探讨 1 型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶[poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1] 抑制剂对血管紧张素Ⅱ刺激培养的大鼠心肌细胞 Akt1 活性和表达的影响及机制。 方法：①采用胰酶和胶原酶双酶消化和差速贴壁法分离乳鼠心肌细胞并培养。用 10-7mol/L AngⅡ诱导，观察心肌细胞 PARP-1 活性以及 PARP-1 蛋白，Akt1 蛋白及其 下游靶基因 Hsp70 蛋白的表达情况，并观察使用 PARP-1 抑制剂 3AB 对上述基因表达 的影响。②采用免疫共沉淀的方法探讨 PARP-1 影响培养的大鼠心肌细胞 Akt1 活性和 表达可能的机制。 结果：血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导乳鼠心肌细胞内 PARP-1 蛋白，Akt1 蛋白，Hsp70 蛋白表达水平显著增加；使用 PARP-1 抑制剂 3AB 后，PARP-1 活性以及蛋白表达水 平降低，而 Akt1 蛋白，Hsp70 蛋白表达水平进一步增加；使用 PI3K 抑制剂 LY294002 以及缬沙坦后，PARP-1 蛋白，Akt1 蛋白，Hsp70 蛋白表达水平均显著降低。采用免 疫共沉淀的方法显示 PARP-1 蛋白能和 Akt1 蛋白结合，Akt1 蛋白能被 PARP-1 蛋白多 聚核糖化修饰，同时 PARP-1 蛋白能被磷酸化修饰。 结论：AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞内 PARP-1 蛋白表达和活性均增高，通过激活 PI3K/Akt 通路，使 Akt1 蛋白及其下游靶基因 Hsp70 蛋白表达增加；抑制 PARP-1 可 以增强 Akt1 的表达继而增加 Hsp70 的表达。PARP-1 蛋白调节 Akt1 蛋白表达及活性 的机制一方面通过蛋白-蛋白间直接相互作用，另一方面通过 Akt1 蛋白多聚核糖化， 而 PARP-1 蛋白能被磷酸化修饰也可能参与其中。 关键词：1 型多聚 ADP 核糖合成酶；PI3K/Akt；热休克反应蛋白 ；血管紧张素Ⅱ Poly (ADP-ribose) polymerase-1 modulates the enzymatic activities of Hsp70 via PI3K/AKT pathway in cultured cardiac myocytes Postgraduate:xiong yong Supervisor: Prof. Huang Kai Institute of Cardiovascular Disease，Tongji Medical College, Huangzhong University of Science Technology, Wuhan 430022,China Abstract Objective To investigate the role of poly (ADP-ribose) polymerase1 in regulation of the enymatic activities of Hsp70 through PI3K/Akt pathway in cultured rat cardiac myocytes. Methods Primary cultured neonatal cardiomyocytes were divided into 5 groups, at random. Group 1 (control group) received no treatment. Group 2 (AngⅡ group) received treatment with AngⅡ(10-7mol/l) alone for 24 hours. Group 3(3AB group) were pretreated with 20mmol/l PARP inhibitor 3-aminobenzamide(3AB) for 1 hour, followed by incubation with AngⅡ(10-7mol/l) for 24 hours. Group 4(LV group) were pretreated with 25mmol/l PI3K inhibitor LY294002（LY）for 1 hour, followed by incubation with AngⅡ(10-7mol/l) for 24 hours. Group 5 (VAL group) were pretreated with 10-7mol/l Valsartan（VAL）for 1 hour, followed by incub