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健脾丸抗肝癌作用其作用机制实验の研究
中文摘要
健脾丸抗肝癌作用及其作用机制的实验研究
摘 要
目的:通过体内外实验,探讨健脾丸的抗肝癌作用,
并提示其可能的作用机制,为该方治疗肝癌提供理论依据,
并树立中医肝癌“本”是“脾虚”的观点。
方法:1体外实验:运用中药血清药理学原理和方法,
制备健脾丸含药血清。采用四氮唑盐(MTT)法检测不同
浓度健脾丸含药血清对人肝癌细胞SMMC.7721作用24h、
48h、72h增殖抑制作用的影响。应用流式细胞技术(FCM)
检测不同浓度健脾丸含药血清对人肝癌细胞SMMC.7721
作用72h后细胞凋亡率和细胞周期,及细胞bcl。2和bax基
因蛋白表达。2体内实验:取60只昆明种小鼠,无菌条件
下将小鼠肝癌细胞H22腹水瘤细胞接种Nd,鼠右腋皮下,
化疗(5.氟尿嘧啶)组每天腹腔注射0.2ml/只,即0.5mg/
1.2089/ml灌胃,0.4ml/只;阴性对照组每日灌服生理盐水
0.4ml/只。每日灌胃一次,连续给药10天,于次日处死,
剥离瘤组织,称重,计算抑瘤率。取脾脏称重,计算脾指数。
采用流式细胞技术(FCM)检测各组瘤组织细胞凋亡率和
细胞周期,及细胞bcl.2和bax基因蛋白表达。采用免疫组
化法观察不同浓度瘤组织细胞形态,及bcl.2和bax基因蛋
白表达情况。
结果
中文摘要
1体外实验结果
后,低、中、高剂量组细胞抑制率分别为:7.28%、11.44
%、26.14%,与阴性对照组相比能显著抑制肝癌细胞
高剂量细胞凋亡抑制率分别为:15.67%、20.90%、33.47%,
与阴性对照组相比能显著抑制肝癌细胞SMMC.7721的生
长(P0.05)。作用72小时后,低、中、高剂量细胞凋亡抑
且中药对肝癌细胞SMMC.7721的生长抑制作用呈剂量时
间依赖性。本实验结果显示,在一定浓度范围内中药健脾丸
能抑制肝癌细胞SMMC.7721的生长。
1.2健脾丸含药血清低、中、高剂量组作用于肝癌细胞
%,各中药组与其相比均有显著差异(PO.05)。S期细胞
期细胞比例为:35.933%,各中药组与其相比均无显著差异
(PO.05)。低、中、高剂量组凋亡率分别为;6.985%、
其相比均有显著差异(PO.05)。且细胞凋亡率随中药健脾
丸剂量增加而升高。
1.3流式细胞仪定量分析,结果显示:健脾丸含药血清低、
中、高剂量组细胞bcl.2基因蛋白的荧光指数(F1)分别为
中文摘要
照组为1.1814±0.0035,各实验组与阴性对照组相比均有显
著差异(P0.05),且随健脾丸含药剂量增加蛋白表达呈降
1.0392±0.0208,各组与阴性对照组相比均有显著差异
(P0.05),且随健脾丸含药剂量增加bax蛋白表达呈增加
趋势。
2体内实验结果
2.1健脾丸低、中、高组对H22移植瘤具有明显抑制作用,
组相比均有显著差异(P0.01),并呈剂量依赖性。化疗组
抑制率为52.76%,健脾丸高剂量组与之相比无显著差异
(PO.01)。
2.2健脾丸低、中、高剂量组荷瘤小鼠的脾指数分别为:8.038
2.3低、中、高剂量组瘤组织细胞经流式分析仪检测后,Go/G,
性对照组为:58.400%,与对照组相比均有显著性差异
(P0.05)。低、中、高剂量组肿瘤细胞凋亡率分别为:
性对照组相比均有显著性差异(P0.05)。5.FU组细胞凋亡
率为47.71%,健脾丸高剂量组低于阳性对照组(P0.05)。
2.4健脾丸低、中、高剂量组,瘤组织细胞bcl-2基因蛋白
中文摘要
1.0420±0.0682;各实验组与阴性对照组相比均有显著差异
(P0.01),且随健脾丸含药剂量增加蛋白表达而降低。bax
加。
2.5免疫组化检测中,因样本含量较少不足以进行统计学分
析,但经组织形态学分析,中药低、中、高剂量组细胞浆中
出现棕黄色颗粒说明bcl.2基因蛋白表达阳性,且可看到随
中药剂量增加bcl.2表达逐渐减弱。中药低、中、高剂量组
细胞浆中亦出现棕黄色颗粒说明bax基因蛋白表达阳性,且
随中药剂量增加bax表达逐渐增强。以上基因蛋白表达趋势
与流式定量分析所得结果相符。
结论
1健脾丸可抑制肝癌细胞的生长,与对照组比,各浓度组在
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