低压电脉冲刺激对黑色素瘤小鼠的抑瘤作用的研究-内科学专业论文.docx

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 LVEPs low voltage electric pulses 低压电脉冲 EP electroporation 可逆性电穿孔 IRE irreversible electroporation 不可逆电击穿 ECT Electrochemotherapy 电化学治疗 IEM Intracellular electromanipulation 细胞内电处理 d Day 天 h hour 小时 RNA Ribonucleic Acid 核糖核酸 cDNA Complementary deoxynucleic acid 互补脱氧核糖核酸 VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 IRE-1 inositol requiring enzyme-1 肌醇需求酶-1 ATF-6 activating transcription factor -6 活化转录因子-6 eIF2α eukaryotic translation initiation factor 2α 真核翻译起始因子 2α MMP-9 Matrix Metalloproteinase-9 基质金属蛋白酶-9 CHOP CCAAT enhancer-binding protein homologous protein 结合蛋白同源蛋白 PLK-1 Polo-like kinase-1 Polo 样激酶-1 PTP permeability transition pore 通透性转运孔 EDTA Ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 qRT-PCR Real-time quantitative polymerase chain reaction 实时荧光定量 PCR PRAP-1 poly-ADP ribose polymerase-1 DNA 修复酶 SPF specific pathogen free 无特定病原体 cyC cytochrome C 细胞色素 C PERK double-stranded RNA-activated protein kinase like ER kinase 双链 RNA 激活蛋白 激酶样内质网激酶 1 低压电脉冲刺激对黑色素瘤小鼠的抑瘤作用的研究 摘要 目的：探讨低压电脉冲(low voltage electric pulses,LVEPs)刺激对 B16F10 黑色素瘤荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。 方法：1)采用 B16F10 黑色素瘤细胞于 BALB/c 小鼠背部皮下成功 构建荷瘤动物模型，并随机均分为 4 组：对照组、电脉冲（10hz、20hz、 30hz）刺激组。2)设定相对安全的刺激电压 30 V、脉宽 1ms，用不同 频率（10hz、20hz、30hz）的电脉冲作用于处理组小鼠，以 30min/d 连 续电刺激 20d。3）每日测量各组肿瘤结节最长径 a、最短径 b，计算体 积值及其相应抑制率，并制作出各组肿瘤结节体积增长的变化曲线。4） 经 20d 电刺激，将各电刺激组和对照组小鼠的黑色素瘤组织进行 HE 染色并于光镜下观察其形态学变化。5）采用实时荧光定量聚合酶链式 反应 (qRT-PCR)测定各组黑色素瘤组织中半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3) 和基质金属蛋白酶-9（Matrix Metalloproteinase-9,MMP-9）mRNA 的表 达变化。6）采用免疫组织化学染色法半定量检测各组黑色素瘤组织中 caspase-3 和 MMP-9 蛋白的表达变化。 结果：1）经电压 30 V、脉宽 1ms、不同频率（10hz、20hz、30hz） 的电脉冲刺激后，与对照组相比：在电刺激 7 d 时 30hz 组小鼠的肿瘤 体积缩小（P＜0.05）；在电刺激 14 d 时 20hz 组、30hz 组小鼠肿瘤体积 缩小（P＜0.05）；在电刺激 20 d 时各电刺激组肿瘤体积缩小（P＜0.05）， 2 且（10hz、20hz、30hz）刺激组的抑制率分别为 18.75%、32.03%、63.12%。 2）经 20d 电刺激，光镜下可见电刺激组肿瘤细胞密集度下降、核固缩、 坏死较对照组多，变化随着频率增大而明显。3）各电刺激组 caspase-3 mRNA 及蛋白质表达增加；MMP-9 mRNA 及蛋白质表达降低，且 caspase-3、MMP-9 表达强度变化随着频率增大而增强。 结论：低压电脉冲刺激可抑制黑色素瘤小鼠肿瘤体积的增长，