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第十七讲药物制剂微生物检验
第一节 体外抗菌试验 药物的体外抗菌试验包括用于区别药物是抑菌或杀菌药物的抑菌试验;测定药物杀菌活性的杀菌试验;以及检查两种药物联合作用的联合抗菌试验等。一般抑菌药物只能抑制微生物生长,不能杀死微生物,抑菌药物被除去,微生物又可以恢复继续生长。杀菌药物能杀死微生物,杀菌药物除去后,微生物仍然不能生长。 第十七章 药物制剂的微生物检验 药物的抑菌作用或杀菌作用是在一定条件下相对而言的。在我们检测时,药物的作用受到用药时培养基的组成、温度、PH值及所用的菌种、菌量等各个因素有关。 虽然说体外抗菌试验有很多优点,但是由于体外抗菌试验没有复杂的体内因素影响,因此药物体外抗菌试验和体内抗菌试验可能会出现不一致的结果。所以,一般我们在体外对药物进行测试后,有效的药再要进行体内试验,如果体内试验再次证实此药有效的话,才能推荐应用到临床。 一、药物的体外抑菌试验 (一)体外抑菌试验 药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法,其中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。 ? 1、连续稀释法 稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法(斜面法)两种。这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度(MIC):是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度,通常用μg∕ml或U/ml表示。 (1)液体培养基连续稀释法 (2)固定培养基连续稀释法 1)平板法 将系列浓度的药物混入琼脂平板,用微量加样器或多点接种仪接种试验菌,可在一组平板上测定多种试验菌的MIC。 2)斜面法 将不同浓度的药物混入培养基中制成斜面,然后在斜面接种一定量试验菌,培养后观察其MIC值。 2.琼脂扩散法 利用药物在琼脂培养基中扩散,并在一定浓度范围内抑制细菌生长的原理进行的。一般用于细菌和酵母菌的药敏试验。 1)? 滤纸片法(纸碟法) 滤纸片法是最常用的方法,适用于新药的初筛试验(初步药物是否有抗菌作用)及临床的药敏试验。 滤纸片分湿、干两种,可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面,也以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。 世界卫生组织规定了抗菌药物的敏感性评定标准,在标准实验条件下根据抑菌圈大小来判断,比如: 抗生素或化疗药物 抑菌圈直径(mm) 耐药 中敏 敏感 氯霉素 ≤12 13-17 ≥18 红霉素 ≤13 14-17 ≥18 四环素 ≤14 15-18 ≥19 卡那霉素 ≤13 14-17 ≥18 (2)挖沟法 (3)打孔法 (二)体外杀菌试验 杀菌试验是用来评价药物对微生物的致死活性的。 1、最低杀菌浓度(MBC)(最小致死浓度MLC)的测定 按液体培养基稀释法的操作方法测定药物的MIC。然后把未长出菌的各个试管培养液分别移种到无菌平板上,培养后凡是平板上无菌生长的药物最低浓度就是最小致死浓度(MLC)。如果是细菌的话可以称为最小杀菌浓度(MBC)。 2、 活菌计数法 将定量的试验菌加入到一定浓度的定量药物中,作用一定时间后,取样进行活菌数计数,从存活的微生物数量计算出药物对试验菌的致死率,从而判断药物的杀菌能力。 活菌计数一般是将定量的药物与试验菌作用后混合液稀释后,混入琼脂培养基做成平板,培养后数平板上形成的菌落数,由于一个菌落是由一个细菌繁殖而来的,所以可以用菌数乘以稀释倍数,计算出混合液中存活的细菌数。 3、酚系数测定(石炭酸系数测定) 酚系数是以酚为标准,将待测的化学消毒剂与杀菌效力相比较,所得的就是杀菌效力的比值。 由于各种化学消毒剂杀菌原理各不相同,因而这种方法仅仅适用于酚类消毒剂杀菌效力的测定。 具体的测定方法是分别将酚及待测化学消毒剂按不同比例稀释,各取5ml放到试管中,再加入经24小时培养后的菌悬液各0.5ml,混匀后放入 20℃水浴中,5、10、15分钟分别取一接种环混合液移种到另一支5 ml的肉汤培养基中,37℃培养24小时记录生长情况。 (三)联合抗菌试验 联合抗菌试验主要用于测定两种抗菌药物联合应用时的相互影响。两种抗菌药联合应用时抗菌作用加强的称为协同作用;抗菌作用减弱的称为拮抗作用;相互无影响的称为无关。常用的联合抗菌试验的方法有以下几种。 出现4种结果: ①无关作用小,两种药物联合作用的活性 等于
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