HPLC高效液色谱培训--PPT.ppt

高效液相色谱法; 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。 它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较： ; 1．高效液相色谱法与经典液相色谱法 ;2．HPLC与GC ;(3)GC一般都在较高温度下进行的，而HPLC法则经常可在室温条件下工作。 总之，HPLC是吸取了GC与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展。目前HPLC已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。 HPLC主要缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。;3. 液相色谱分离原理及分类;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;二、主要部件（main assembly of HPLC） ;第二节 高效液相色谱仪器; ;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;（动画）;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;4．进样系统 ;第二节 高效液相色谱仪器;5 . 分离系统——色谱柱 ;第二节 高效液相色谱仪器;6．检测系统 ; ;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;二极管阵列检测器（DAD）优点：;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器;第二节 高效液相色谱仪器; 色谱柱流出液导入雾化器，被载气（压缩空气或氮气）雾化成微细液滴，液滴通过加热漂移管时，流动相中的溶剂被蒸发掉，只留下溶质，激光束照在溶质颗粒上产生光散射，光收集器收集散射光并通过光电倍增管转变成电信号。因为散射光强只与溶质颗粒大小和数量有关，而与溶质本身的物理和化学性质无关，所以ELSD属通用型和质量型检测器。 适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测。其灵敏度与载气流速、汽化室温度和激光光源强度等参数有关。与示差折光检测器相比，它的基线漂移不受温度影响，信噪比高，也可用于梯度洗脱。;第二节 高效液相色谱仪器;。 。 ;一、液-固吸附色谱法(LSAC) liquid-solid adsorption chromatography; ;第三节 HPLC分离类型与原理;2．固定相 ;3. 流动相 ;第三节 HPLC分离类型与原理;第三节 HPLC分离类型与原理;第三节 HPLC 分离类型与原理; ; 在液液色谱中为了避免固定液的流失。对流动相的一个基本要求是流动相尽可能不与固定相互溶，而且流动相与固定相的极性差别越显著越好。 根据所使用的流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配色谱。 正相分配色谱normal phase：采用流动相的极性小于固定相的极性，它适用于极性化合物的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出。 反相分配色谱reverse phase：采用流动相的极性大于固定相的极性。它适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。 ;三、化学键合相色谱法（CBPC） chemical bonded partition chromatography;第三节 HPLC分离类型与原理;第三节 HPLC分离类型与原理;2．键合固定相的制备 （l）硅酸酯（≡Si一OR）键合固定相,它是最先用于液相色谱的健合固定相。用醇与硅醇基发生酯化反应： ≡Si－OH＋ROH→≡Si－OR＋H20 由于这类键合固定相的有机表面是一些单体，具有良好的传质特性,但这些酯化过的硅胶填料易水解且受热不稳定，因此仅适用于不含水或醇的流动相。 （2）≡Si－C或Si一N共价键合固定相 制备反应如下 ; 共价键健合