环氧化酶2基因启动子区765G／C多态性与糖尿病视网膜病变的相关性研究.doc

环氧化酶-2基因启动子区-765 G / C多态性与糖尿病视网膜病变的相关性研宄 赵斌1孙照莲2(1泰山医学院附属医院眼科271000; 2山东大学附属省立医 院胸外科250021) 】R的探讨环氧化酶-2(COX-2＞棊因启动子区-765G/C多态性与糖鉍病视 网膜病变(DR＞的相关性。方法采用熔解曲线不同的高通量SNP分型法方法，在 屮国泰安地区汉族人群屮，对182例2型糖尿病变伴视网膜病变者(DR), 150例 健康对照者的COX-2棊因-765G/C多态性进行检测；比较分析各组间基因型频率 及等位基因频率进行分析。结果-765G/C位点的基因型GC在糖尿病视网膜病 变组明显增高(OR=2.14,95%CI=1.10-4.16)o结论泰安地区汉族人群屮，COX-2 棊因-765G/C多态性与DR有相关关系，-765G/C位点的基因型GC可能是糖鉍病 视网膜病变的遗传易感因素。 关键词】糖尿病，2型糖尿病视网膜病变环氧化酶2多态性 屮图分类号】R587.2 】A 】2095-1752 (2012) 35-0128-02 糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病常见的微血管并发 症之一，长期慢性的高糖血症是其发病的基础有观点认为免疫/炎症因素在DR 的发生发展中起到中心作用。环氧化酶-2,在正常状态下低表达或不表达，但在 炎症介质、细胞因子、激素等体内外因素诱导K表达。Cipollone F等人曾经报道， 炎性介导的环氧化酶2可以诱导前列腺素E2的表达，导致炎性斑块屮巨噬细胞 的棊质金属蛋白酶2 (Matrix metalloproteinase 2,MMP2)和基质金属蛋白酶9 (Matrix metalloproteinase 9,MMP9)的高表达，进而影响炎性进程。已i正实，COX-2 基因才(rs20417)多态性会影响COX-2蛋白的表达，但就该位点多态性与DR的相 关性鲜见报道。本研宂旨在探讨屮国泰安地区汉族人屮COX-2棊因-765G / C多 态性与DR的内在联系。 1资料与方法 1.1资料 1.1.1仪器与试剂 仪器：7500实吋定量PCR仪(美国应用生物系统公司)；PERISM-3100 型基因测序仪(美国应用生物系统公司)；试剂：DNA抽提试剂盒(天跟生化科 技有限公司)；AmpliTaq DNA Polymerase, Stoffel Fragment(美国座用生物系统公 司)；乙二胺四乙酸(ethylenedia2 mine tetraacetic acid ,EDTA)抗凝管;Tris-HCI； 氯化钾；氯化镁；dATP, dCTP, dGTP 和 dUTP; 0.2times; SYBR Green I； 5% 二甲 基亚砜(DMSO)； 2.5%甘油；ROX染料；双蒸水 1.1.2研究对象 疾病组：2006年至2011年期间在山东省泰山医学院第一附属医院眼科 住院治疗的糖尿病变伴视网膜病变患者182例，男118例，女63例， 52plusmn;12岁。患者均为:1.符合1999年WHO标准诊断的2型糖尿病(T2DM); 均行眼底镜检查和眼底血管荧光素造影，参照1985年全国眼底病协作组制定 的分级标准，达到DR非增殖期；3.山东泰安籍汉族。 对照组.?为与疾病组同期在泰山医学院第一附属医院保健查体中心查体 的无糖尿病的健康对照150例，男98例，女52例，(53plusmn;13)岁。其年 龄、性别与病例组匹配。所有受试者均为山东泰安籍汉族人。 1.2方法 1.2.1标本采集及基因组DNA抽提 采集空腹外周静脉血2mL,乙二胺四乙酸 (ethylenedia2minetetraaceticacid,EDTA)抗凝管储存。DNA抽提试剂盒(天跟生化科 技有限公司)抽提基因组DNA,-20°C保存待用。 1.2.2基因型检测 目的片段扩增： 应用熔解曲线不同的高通量SNP分型法。 PCR引物序列参照文献［1］。应用Oligoreg; 6设计。引物序列见表1。 引物由上海生工生物技术冇限公司合成。 PCR反应体系为15mu;L, K中基因组DNA为lmu;L。剩余组分为： 三种引物每种 0.2mu;mol/L； AmpliTaq DNA Polymerase, Stoffel Fragment(应用生 物系统公司｝1.8U; 10mmol/LTris-HCI； 40mmol/L 氯化钾，pH8.0； 2mmol八氯化 镁；dATP, dCTP 和 dGTP 各 50mu;mol/L； 25mu;mol/L dTTP； 75mu;mol/L dUTP； 0.2times; SYBR Green I； 5% 二甲基亚砜(DMSO); 2.5% 甘油;0