肝病病理形态特点与免疫组化染色体会.pptVIP

常见肝病的病理形态特点及免疫组化染色的几点体会 复旦大学病理学系 张锦生 肝穿刺标本检查和处理原则 1. 肉眼观察 　肝穿刺标本呈完整园柱状，长度1－3 cm 　典型的慢性肝炎肝纤维化标本呈竹节状外观 　肝硬化的穿刺标本，呈不规则碎块 3. 染色 除常规ＨＥ染色供病理诊断用之外，根据条件 　　　　和需要作以下特殊染色： 　 ①网状纤维染色， 　 ②Masson三色染色， 　 ③胶原纤维染色(Sirius red或免疫组化 ) 肝癌(LIVER CANCER) HCC ICC Combined hepatocellular and cholangiocarcinoma 肝癌病理诊断常用免疫组化和特染 Hep Par1 线粒体相关抗原，与AFP无关 　对胎儿和成人肝细胞高度特异 (HCC:阳性率82-97%） 　 AFP 　HCC阳性率：15-82% CD34: HCC型染色 　　长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见. CK 18: HCC,ICC, Metastatic carcinoma:100%+ 上皮性肿瘤标志物 CK 19: 胆管型CK: CK19,CK7 肝细胞　－ 胆管上皮，ICC：77-100% ICC最好的标志物 CEA： monoclonal CEA:毛细胆管－ 　　　　ICC，转移性肝癌：60-75%+ HCC:0-11%+ polyclonal CEA: 毛细胆管＋ 　HCC特异标志物之一 　　　　 CK 20: 胃肠道腺癌的主要标志物 　转移性腺癌：74-100%+ ICC:10%+ HCC:0%+ MOC31: 抗人上皮相关抗原 　转移性腺癌：100%+ ICC: 92.9%+ HCC: 0% + 胃癌肝转移 HBsAg: HCC: 70-80% + 黏液染色：AB/PAS 酸性黏多糖：兰色（胆管腺瘤,ICC腔内黏液） 　中性黏多糖,糖原：红色（假腺管型HCC) 　 免疫组织化学染色的几点体会 一、组织和细胞标本制备 目的： (1)最大限度地保存组织结构。 (2)最大限度地保存抗原性。 注意事项：在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻?石蜡?)。 1.取材 （1）原则：尽可能新鲜，动物标本可选 用动脉灌注固定。 （2）取材部位：尽量包括病灶和正常组 织交界处，避免选择坏死组织。 （3）避免挤压：受挤压组织不但影响 HE切片的观察，还造成非特异性 免疫组化组织着色。 2.固定 根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越好。组织块厚薄大小要合适。 容器要大,固定液要宽余. 固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗漏,阳性会减弱甚至转阴. 选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福尔马林 3.制备蜡块 冲水、脱水、透明、包埋。尽可能采用低温石蜡包埋,如无低温石蜡,可将组织块尽可能修薄,以缩短脱水、透明、包埋时间,尽可能保存组织内抗原稳定。 4.制备冰冻切片 冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材料均适合于冷冻包埋、切片。 ★防止冰结晶!!! 预处理:目的是减少组织中的水分以减少冰结晶的产生,方法是将已固定、冲洗的组织块放入20～30%蔗糖缓冲液内,4℃冰箱过夜,再将组织块埋于OCT包埋剂 速冻:目的是使温度很快下降迅速通过冰点,防止冰结晶产生。 速冻方法 液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片; 干冰-丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达-70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰-丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。 免疫组化染色后的衬染 常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果阳性信号在细胞核,切勿衬染细胞核!!! 细胞质衬染:1%亮绿,但退色较快,可改用坚固绿(FAST BLUE)染,则保存时间较长 封固和保存 绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以外的底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性封固物如明胶、甘油缓冲液等。 酶免疫染色切片可保存数周甚至数月。 免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。 一.常用免疫组织化学方法 2.免疫组织化学 常用方法: