艾滋病抗体检测技术(免疫印迹法)与质量控制(黎俊宏).pptVIP

* * 海恩法则是德国飞机涡轮机的发明者德国人帕布斯·海恩提出一个在航空界关于飞行安全的法则。 准备 设定移液量 安装吸头 按压至第一停点位置 吸液 贴壁 轻轻按压放液 贴壁 按压至第一停点后，再按压第二停点，排尽吸头残余液体 松开按钮，弹回至原来的位置 按压吸头推顶，退除吸头 加样器的使用 正向加样法 反向加样法 加样器-注意事项 根据所需取液量选择相应的移液器及吸头，使用带滤芯的吸头，可防止交叉污染。 日本WATSON ：低吸附、高精度、无RNA酶、无DNA酶、无热源、加长吸头 、带滤芯已消毒 吸取液体时应缓慢匀速吸取，避免液体溅到移液器头上；打出液体后拇指不应松开按钮，将吸液嘴压掉后再将拇指松开，避免液体回吸。 在调整取液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意计数器显示的数值不要超过其可调范围。 连续可调式移液器不可在无吸头时使用，吸头有液体时不可平放或倒置。 加样器-注意事项 操作时要慢和稳，吸嘴浸入液体深度要合适，吸液过程尽量保持不变；改吸不同液体、样品或试剂前要换新吸嘴；发现吸嘴内有残液时必须更换；新吸嘴使用前应先预测。 为防止液体进入移液器套筒内，注意以下几点：压放按钮时保持平稳；移液器不得倒转；吸嘴中有液体时不可将移液器平放；5ML及10ML移液器一定要加滤芯。 切勿用油脂等润滑活塞或密封圈。 使用了酸性或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸馏水清洗活塞及密封圈。 加样器-注意事项 连续可调式移液器在取样加样过程中应注意移液嘴不能触及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、废液瓶、所取试剂及加样的样品管应摆放合理，以方便操作过程、避免污染为原则。 连续可调式移液器在使用完毕后应置于移液器架上，远离潮湿及腐蚀性物质。 在取液之前，所取液体应在室温（15-25?C）平衡；液体温度与室温有异时，将吸嘴预洗多次再用；移液温度不得超过70℃。 加样器-注意事项 加样器-常规维护 加样器应根据使用频率进行维护，但至少应每3个月进行一次，具体方法如下： 1．一般维护可用中性洗涤剂（如洗餐具用的洗涤灵）清洁，或者用60%的异丙醇，然后用蒸馏水反复洗涤，去除洗涤剂或异丙醇，晾干。清洁后活塞处可使用一定量的润滑剂。 2．如果有液体进入加样器内的严重污染，可以将加样器拆开后进行清洁，具体拆开步骤参照加样器说明书（不同的加样器的拆开方式有所不同）。 3．高压消毒，有的加样器的吸管部分可高压消毒（121℃，20分钟），如Eppendor的Research单道可调加样器。但消毒时不可超温超时，也不能挤压放置，以免造成变型。 定期校准：有资质的服务商提供校准服务，并贴已校准标签。 AIDS confirmation laboratory 艾滋病确证实验室 AIDS confirmation laboratory 艾滋病确证实验室 海恩法则 “每一起严重事故的背后，必然有29次轻微事故和300起未遂先兆以及1000起事故隐患。” ——德国人帕布斯?海恩 （德国飞机涡轮机的发明者 ） 两点： 一是事故的发生是量的积累的结果； 二是再好的技术，再完美的规章，在实际操作层面，也无法取代人自身的素质和责任心。 “祸之作，不作于作之日，亦必有所由兆。” 细节决定结果 态度决定成败 谢谢！ 1、从样品的接收开始就要遵守SOP,到后面实验的过程,到原始记录,条带的判定,废弃物的处理,出报告,发报告,都要遵守规章制度或SOP,切记千万不能出现张冠李戴的情况! 2、质控不是结果的质控,而是过程的质控 3、要做好这一点,最最关键的就是加样那一步,可以这么说，如果这一步做好了，那整个实验就成功了80%.当然了，后面洗带子也很重要,也要注意. 所以在没有gp160的情况下是不可能检测到gp41的 HIV-1抗体阳性 检测出2条env带（gp160/gp41和gp120）及gag（p17，p24，p55）或pol（p31，p51，p66） HIV抗体阴性 没有病毒的特异性条带或只检测出p17抗体 HIV抗体不确定 出现任何病毒特异条带，但不足以判断为阳性 试剂盒说明书 技术规范（2009版） HIV-1抗体阳性 至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现，或至少1条env带和p24带同时出现。 HIV抗体阴性 无HIV抗体特异带出现。 HIV抗体不确定 出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。 HIV-2抗体血清学阳性 出现HIV-2型特异性指示带的样品：如果同时呈HIV-1 抗体阳性反应，只需报告HIV-1 抗体阳性，不推荐进一步做HIV-2 抗体确证试验；如果同时呈HIV-1抗体不确