肿瘤生物治疗进展与产业化.pptVIP

肿瘤生物治疗必威体育精装版进展及产业化开发 广州蓝星生物科技开发有限公司 王虹 肿瘤生物治疗主要策略体现在以下几方面： ● 增强机体抗肿瘤免疫； ● 诱导肿瘤细胞凋亡； ● 抑制肿瘤血管的形成； ● 提高宿主对肿瘤常规治疗的耐受力或加速损伤的恢复。  单克隆抗体及其偶联技术 以单抗介导的靶向性抗肿瘤药物正成为肿瘤生物治疗产业化开发的热点。1997年美国上市的利妥昔单抗（rituximab）为重组嵌合抗CD20单克隆抗体，用于治疗淋巴瘤，标志着单抗已进入临床应用阶段。 ● 2003年治疗用单抗的销售总额已超过52亿美元。 ● 2006年预计50~60个治疗性单抗上市。 ● 2010年预计单抗销售额200亿美元。 ● 美国已占全球单抗市场90%—一支独秀。 ● 完全人源化单抗现有多个处于临床前阶段。 抗单抗药物两大类 抗肿瘤单抗 拮抗血管生成单抗—Avastin（2004年） 抗肿瘤单抗偶联物 抗生素与单抗偶联—Mylolarg（2001年） 性单抗—Zevalin（2002年） 近年来单抗药物研究具有以下特点：第一、寻找新的分子靶点 内皮因子（Endoglin）： 膜结合性糖蛋白； 分子量180KD； 肿瘤组织边缘血管，尤其是新生血管内皮细胞高表达。 内皮因子Endoglin（又称CD105）作为生成血管内皮细胞特异标记物，正成为抑制肿瘤血管生成、治疗肿瘤的重要靶分子；动物实验表明：抗CD105单抗与免疫毒素连接，可使肿瘤完全消失，现已进入临床试验阶段。多种内皮细胞生长因子的单抗也显示了较好的实验效果，如人抗血管内皮生长因子（VEGF）现已进入了人体临床试验。 第二、抗体的人源化 目前人源化单抗的产业化技术已较为成熟。 ?转基因小鼠产生人源化单抗（1997年）； ?核糖体展示技术（1999年）; ?噬菌体表达系统； 转基因小鼠： ?灭活小鼠Ig基因； ?克隆并完整转入全部或大部分人Ig基因座，并在小鼠体内表达； ?产生单抗具有“鼠糖基化模式”； ?操作程序复杂。 核糖体展示 (ribosome display) 核糖体展示技术的核心是利用体外核糖体表达载体构建 sc Fv抗体库 ,并于体外转录为 m RNA,体外翻译表达 ,随后以固相化的抗原分子亲和筛选出核糖体 -m RNA-sc Fv复合物中的高亲和力 sc Fv。这种技术在实验中不用任何细胞 ,是第一个完全在体外筛选有功能蛋白的方法。 该技术克服了其他一些蛋白质筛选技术 (如噬菌体展示 )需转化细菌或真核细胞 ,因效率不高而降低库容 ,减少抗体多样性的局限 ,并避免了宿主随细胞基因组复制过程中可能丢失而产生的库容下降 ,同时亦解决了因抗体筛选条件不利于宿主细胞生存而导致抗体丢失这一难题。由于核糖体展示技术的体外翻译、体外筛选的特点 ,大大缩短了实验周期 ,具有省时省力、方便快速的特点。 噬菌体抗体库 原理：采用RT—PCR技术将全套人抗体重链V区基因克隆出来，在噬菌体表面以抗体—外壳融合蛋白的形式表达分泌，经筛选后获得特异性抗体。该技术不经过繁杂的杂交瘤途径，即可获得全人源化抗体。从理论上讲该抗体库可筛选出任何一种单抗。 噬菌体抗体库 与传统杂交瘤技术相比有极大的优越性，现正取代杂交瘤技术。 主要特点： 简单易行，采用经典的PCR分子克隆等技术，即可操作； 在短期内（数周）可筛选106~108个克隆； 筛选获得的抗体库抗体可用原核表达系统表达，无需组织培养，极大降低了成本； 制备的抗体通常为Fab片段或ScFv抗体，没有Fc段，亲和力有一定影响（某些肿瘤治疗性单抗亲和力太强反而不好），但如果对某些抗体基因进行改构，同样可获得亲和力强的抗体。 第三、偶联物分子的小型化 研制小型化单抗药物对提高药物疗效有重要意义，通过酶切方法获得的Fab片断，其分子量相当于完整单抗的1/3，而通过基因工程技术制备的单链单抗ScFv，相当于完整单抗的1/6。例如单抗Fab片段与平阳霉素构成的偶联物有显著抑制肿瘤生长和转移的作用。 第四、单抗药物的高效化 近年发现抗肿瘤抗生素Calicheamicin对肿瘤细