实验二：鸡蛋卵磷脂制备及检测(薄层色谱技术).pdf

生化分离工程实验 实验二：鸡蛋卵磷脂的制备与检测 （薄层色谱技术） 实验申请 实验项目：蛋黄中卵磷脂的提取与TLC检测 实验原料：鲜鸡蛋、纯化卵磷脂 实验试剂： - , pH8),1 乙醇石油醚 （3:1）混合试丙酮 （ mol/L 的碳酸钠溶液， 硅胶，蒸馏水 实验仪器： 旋转蒸发仪、恒温水浴箱、真空泵、布氏漏斗、抽滤瓶、电子天 平烘箱、固定厚度涂布器、方形层析缸、玻璃板、研钵。 辅助器材： 毛细管、玻璃棒、滤纸、漏斗、10ml 量筒、50ml 量筒、烧杯， 圆底烧瓶等。 参考文献： [1]谭天伟. 生物分离技术.北京：化学工业出版社.，2007.7 [2]蒋本国，王艳颖，李春斌，刘秋.生物化学实验.大连民族学院。2010.7 [3]刘宝全. 生化分离工程实验讲义 （内部试用版）.大连民族学院生命科学院.2011.6 qtw-1 实验记录 操作步骤： 操作说明及结果纪录： 1取 10.0g 鸡蛋黄 ↓ 30ml pH8 1h 2蛋黄用 丙酮 （ ）搅拌 ↓ 3过滤后，滤渣用丙酮洗2-3 次 ↓↘收集滤渣 4用30ml 乙醇-石油醚 （3:1）混合试剂搅拌浸提1h ↓↘收集滤液 5抽滤 ↓ 40 6旋转蒸发 （ ℃） ↓ 7收集产品，进行检测 TLC 检测 制板 称取 20 g 孔径为 6 nm 的硅胶 60, 用 45mL 1- 1mol·L 的碳酸钠溶液稀释, 置于 研钵中研磨, 调成均匀的糊状物, 用涂布器 将糊状物均匀地铺在玻璃板上, 铺完后于室 温下风干, 使用前在110 ℃烘箱中活化。 ↓ 点样 用毛细管在层析板距下端 2. 5 cm 处点两个 样,自制卵磷脂样品和标准品, 样点的间距 为3 cm。 ↓ 展开 将展开剂置于层析缸中平衡 30m in, 使溶 剂的蒸汽压在层析缸中达到平衡, 然后放入 层析板, 溶液自下而上在层析板上展开, 上 升速度约 6 cm/h 当展开到层析板高度的 3/4 处即可取出, 置室温下干燥。 ↓ 显色 将显色剂均匀地喷雾在层析板上, 可立即看 到有蓝色斑点出现 提取卵磷脂的关键步骤 1.抽滤时滤纸的剪法 选择大小合适的布氏漏斗，放在滤纸上，用铅笔绕着漏斗的外径画圈，在 滤纸上对应漏斗 径尖头处的方向画个箭头，以便于放滤纸时好找方向。 用剪刀剪下画好的圈，目测布氏漏斗的厚度，以这个厚度为标准，绕剪好 的滤纸再剪一圈。 注意：剪好的滤纸刚好小于内径，能最好地覆盖全部漏斗上的小孔。 使用布氏漏斗时，要在漏斗颈上套一个橡胶圈。作用为：1）能起固定作用， 把漏斗和接 收瓶连接好 2）当抽滤完毕后，先轻轻扭动橡胶圈，再拔出漏斗，防止倒 流。 抽滤之前，先用氯仿浸湿滤纸。 2.旋转蒸发仪的使用技巧 原理：通过电子控制，使烧瓶在最适合速度下,恒速旋转以增大蒸发面积。 通过真空泵 使蒸发烧瓶处于负压状态。蒸发烧瓶在旋转同时置于水浴锅中恒温加热， 瓶内溶液在负压下 在旋转烧瓶内进行加热扩散蒸发。 仪器介绍：蒸馏烧瓶是一个带有标准磨口接口的梨形或圆底烧瓶，通过一 高度回流蛇 形冷凝管与减压泵相连，回流冷凝管另一开口与带有磨口的接收烧瓶相连， 用于接收被蒸发 的有机溶剂。在冷凝管与减压泵之间有活塞，当体系与大气相通时，可以 将蒸馏烧瓶，接液 烧瓶取下，转移溶剂，当体系与减压泵相通时，则体系应处于减压状态。 使用时，应先减压， 再开动电动机转动蒸馏烧瓶，结束时，应先停机，再通大气，以防蒸馏烧 瓶在转动中脱落。 作为蒸馏的热源，常配有相应的恒温水槽。 蒸发前，先组装好仪器，将循环式真空泵、循环水和旋转蒸发器连接好， 检查系统是 否好用，待检查无误后，开始蒸发。温度设置为50℃。 a）换水 在进行蒸发之前，要换好干净的水，防止影响蒸发速率。 b）灌水 在槽中加水，没过排水孔和加热器，但不要