课件：维生素类药物的分析 .ppt

第六节 复方制剂中多种维生素的分析 一、离子对HPLC法测定多种维生素 以樟脑磺酸作为离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠作为抗氧剂 二、反相HPLC法同时测定9种水溶性维生素 三、非水反相HPLC法同时测定4种脂溶性维生素 * 4．旋光性 维生素D2 6个手性碳原子 维生素D3 5个手性碳原子 5．显色反应 甾类化合物 氯仿溶液 黄色 红色 紫色 绿色 6．紫外吸收特性 无水乙醇 265nm 维生素D2 为460－490 维生素D3 为465－495 醋酐 硫酸 E 1cm 1% E 1% 1cm * 二、鉴别试验 （一）显色反应 1．与醋酐-浓硫酸反应 氯仿溶液 黄色 红色 紫色 绿色 醋酐 硫酸 2．与三氯化锑反应 本品 1,2-二氯乙烷 三氯化锑试液 橙红色 粉红色 * 3．其它显色反应 维生素D 三氯化铁 橙黄色 二氯丙醇 乙酰氯 绿色 （二）比旋度鉴别 无水乙醇溶液 维生素D2 比旋度为＋102.5°至＋107.5° 维生素D3 比旋度为＋105°至＋112° * （三）其它鉴别方法 薄层色谱法、HPLC法 制备衍生物测熔点 紫外、红外吸收光谱 （四）维生素D2、D3的区别反应 维生素D2 维生素D3 96%乙醇 10ml 取0.1ml 乙醇1ml 和85%硫酸5ml 红色λmax570nm 黄色 λmax495nm * 三、杂质检查 （一）麦角甾醇的检查 维生素D290%乙醇溶液 洋地黄皂苷溶液 不得发生浑浊或沉淀 * （二）前维生素D的光照产物 * 四、含量测定 正相高效液相色谱法 （一）维生素D测定法 含量以单位表示 每单位相当于维生素D 0.025μg 注意：计算的是维生素D及前维生素D经折 算成维生素D的总量 * 测定在半暗室及避免氧化的情况下进行 第一法：无干扰杂质 第二法：有VA及其他杂质干扰 第三法：用第二法时，前 VD峰受杂质干扰 仅VD峰可分离 * 第一法 内标物：邻苯二甲酸二甲酯 色谱条件及系统适用性试验： 填充剂：硅胶 流动相：正己烷-正戊醇（997：3） 检测波长：254nm 无干扰杂质 * 维生素D3 △ 光照 前维生素D3 反式维生素D3 维生素D3 速甾醇D3 与维生素D3的比保 留 时 间 分离度 ＞1.0　 ＞1.0 溶液组成 先后进样5次，维生素D3 峰面积的 RSD≤2.0 % 0.5 0.6 1.0 1.1 系统适用性试验 * 校正因子测定： 维生素D的校正因子: f1=Asmi/Aims 前维生素D折算成维生素D的校正因子: f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms） 含量测定：计算维生素D及前维生素D折算成 维生素D的总量 mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As * 第二法 第一步：皂化提取 供试品 OH- 加热回流 冷却 乙醚提取 乙醚提取液 挥干乙醚 残渣 甲醇溶解 供试溶液A 有VA及其他杂质干扰 * 第二步：分离收集 供试品溶液A RP-HPLC 维生素D 前维生素D 维生素A及其他杂质 叠峰 分离 收集 供试品溶液B 维生素D及前维生素D 第三步：按第一法进行含量测定（内标法） 挥干 内标的正己烷溶液 溶解 * 第三法 第一步：皂化提取 同第二法得供试品溶液A 第二步： 供试品溶液A RP-HPLC 维生素D 前维生素D 维生素A及其他杂质 叠峰 分离 供试品溶液C 收集 挥干 异辛烷溶解 90℃、1.5h 挥干 正己烷溶解 前维生素D 维生素D 第三步：用第一法色谱条件按外标法计算含量 用第二法时，前 VD峰受杂质干扰 * 苯并－二氢吡喃醇 第五节 维生素E的分析 一、结构与性质 （一）结构 * 名 称 R1 R2 相对活性 α-生育酚 β-生育酚 γ-生育酚 δ-生育酚 CH3 CH3 H H CH3 H CH3 H 1.0 0.5 0.2 0.1 * * * * 生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10 （天然品） （合成品） dl－α－生育酚醋酸酯 * （二）性质 1、溶解性：易溶于有机溶剂，不溶于水 4、UV：乙醇溶液中UV284nm 2、水解性：酯键易水解 △ 3、氧化性：无氧条件下十分稳定，200度也不被破坏； * 75℃15′ （一） 硝酸反应 橙红色 二、鉴别试验 * （橙红色） 生育红 生育酚 HNO3 强氧化剂