课件：微生物的实验室培养.ppt

2．统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法： ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。 ②方法：用计数板计数。 ③缺点：不能区分死菌与活菌。 (2) 间接计数法(活菌计数法)： ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 ②操作：为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300 的平板进行计数。 ③计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 3．操作提示 (1)将待测样品经一系列10倍梯度稀释，然后选择3个稀 释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。 (2)为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到3个 或3个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。 [关键一点]　统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果用菌落数而不是活菌数来表示。 [通一类] 4．通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有 关的叙述中，不正确的是 (　　) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、 高压灭菌后倒平板 B．取稀释倍数分别为104、105和106倍的土壤稀释 液各0.1 mL，分别涂布于各组平板上 C．将培养皿倒置，37℃恒温培养12～24小时 D．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数 . 解析：检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，选择菌落数在30～300的平板进行计数。 答案： D 5．在做分离分解尿素的细菌实验时，某同学从对应106 倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。某同学的结果产生原因可能有 (　　) ①土样不同　②培养基污染　③操作失误　④没有设置对照 A．①②③　　　　　　　B．②③④ C．①③④ D．①②④ 解析：某同学比其他同学的实验结果数据大许多，可能由于选取的土样不同、培养基灭菌不彻底或操作过程中杂菌污染，也可能是操作失误，如配制的培养基中混入其他含氮物质等。 答案： A 营养 要素 含义 作用 主要来源 氮源 凡能提供所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机物化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 营养 要素 含义 作用 主要来源 生长 因子 生长必不可少的微量有机物 酶和核酸的组成成分 维生素、氨基酸、碱基等 水和无 机盐 水不仅是优良溶剂，而且可维持生物大分子的稳定；无机盐是细胞内成分和调节物质 外界摄入 [关键一点]　微生物之所以需要补充生长因子，是由于其体内缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限，而对那些合成能力足以满足自身需求的微生物，其培养基中则不需额外补充生长因子。 2．培养基的类型 划分 标准 培养 基种类 特点 用途 状态 液体 培养基 不加凝固剂 工业生产 固体 培养基 加凝固剂，如琼脂 微生物分离、鉴定等 划分 标准 培养 基种类 特点 用途 用 途 选择 培养基 培养基中加入某种化学物质，用来抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长 培养和分离出特定微生物(如分离酵母菌和霉菌，可以在培养基中加入青霉素) 划分 标准 培养 基种类 特点 用途 用 途 鉴别 培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物，如用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈深紫色并带有金属光泽) 3．平板划线法的注意事项 (1)第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环进行灭菌， 划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表： 第一次灼烧 每次划线之前灼烧 划线结束后灼烧 目的 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，保证每次划线的菌种都来自上次划线的末端 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 (2)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免因温度 太高杀死菌种。 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。 [通一类] 1．右图是微生物平板划线示意图。 划线的顺序为12345。下列操作