专题微生物的培养应用.ppt

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、实 验 设 计 二、结果分析与评价 三、课 题 延 伸 分解纤维素的微生物的分离 一、实 验 设 计 二、实 验 案 例 三、结果分析与评价 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。 2.样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。 3.重复组的结果是否一致 如果各位同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，则需要从各项操作过程中去分析、寻找可能的原因。 能分解尿素的细菌的鉴定 鉴定的原理： 细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的pH升高。 鉴定方法： 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。 （一）纤维素与纤维素酶 纤维素：一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中。 纤维素酶：由微生物分泌的一种复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，由于它们的协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖。 纤维素 C1酶 Cx酶 纤维二糖 葡萄糖苷 酶 葡萄糖 ①取二支20mL的试管 实验：纤维素酶分解纤维素的实验 ②各加入一张滤纸条 ③各加入10mL0.1mol/L的醋酸－ 醋酸钠缓冲液 甲 乙 ④在甲试管中加入1mL蒸馏水， 乙试管加入1mL纤维素酶 ⑤将试管放在140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失 讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？ 刚果红染色法 刚果红能与纤维素形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 （二）纤维素分解菌的筛选 用加入刚果红的纤维素培养基去培养微生物时，如果培养基中出现以菌落为中心的透明圈时，可说明该菌落是纤维素分解菌，因为它已将被刚 果红 染成红色的纤维素分解了。 请你根据实验流程图和提供的三个资料以及“操作提示”，在思考有关问题的基础上，设计出一个详细的实验方案。 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上 筛选产生透 明圈的菌落 阅读与思考 阅读教材28～29页“资料一”～“资料三”，并思考相关问题。 问题一：是液体培养基，因为没有添加琼脂。 问题二：具有筛选作用，因为培养基中的碳源是纤维素，该培养基只有能分泌纤维素酶的纤维素分解菌才能生长。 问题三：选择培养基具有筛选、纯化微生物的作用。 土壤中纤维素分解菌的分离 1.土样采集?：土样采集的方法与本专题课题 2类似。土样的采集要选择富含纤维素的环境，这是因为在纤维素含量丰富的环境，通常会聚集较多的分解纤维素的微生物。如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，过一个月左右也会有能分解纤维素的微生物生长。 2.选择培养?： 选择培养的操作：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30 mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30 ℃下振荡培养1～2 d，至培养基变混浊，重复上述方法再培养一次，然后再进行梯度稀释和涂布平板。 3.刚果红染色法分离：常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。 * * 专题2 微生物的培养与应用 一、微生物的实验室培养 （一）培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称 培养基 一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等（具体见教材15页“100mL牛肉蛋白胨培养基的营养构成”）。 培养基的基本成分 液体培养基（一般用锥形瓶盛装） 固体培养基（一般用试管或培养皿盛装），在液体培养基的基础上再添加琼脂。 培养基的种类 （二）无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。 消毒 无菌技术的种类 灭菌 使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物。 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒； 将培养皿、接种用具进行灭菌； 接种的过程