课件：乙肝病毒的检测.ppt

乙肝病毒的检测 HBV 的三种形态 1,Hepatitis B virion(Dane particle) 2,secreted filament 3,secreted sphere 6 乙型肝炎病毒HBV HBV是嗜肝脱氧核糖核酸病毒科的哺乳动物属的一员。 HBV阳性的血清中有三种病毒颗粒． １.大球形颗粒，完整的HBV颗粒直径为42nm，又名Dane颗粒，分为包膜与核心的两部分，外衣壳及包膜含有表面抗原，衣壳内为核心结构，有核心抗原，核心抗原下面藏有e抗原。 ２.小球形颗粒，阳性血清中最多的颗粒，主要为表面抗原，不含核酸及ＤＮＡ成分，为不完整的ＨＢＶ． ３.管形颗粒，实际上是一串小球形颗粒聚合在一起的，也含有表面抗原． * 生物化学检测 1 HBV血清标志物的检测 2 HBV 分子生物学诊断 3 HBV临床药物疗效检测 4 HBV感染的实验室检查 1.乙型肝炎的生物化学检测 主要指标： ALT, AST, ASTm， 血清白蛋白， 血清胆红素， 胆碱酯酶, 甲胎蛋白, 凝血酶原时间(PT)及部分凝血因子； * 方法学 ELISA：灵敏性高，成本低，适用于普通病人筛查； 胶体金免疫层析法(金标法)：简便易行，可用于急诊病人快速检测； 化学发光法定量检测：价格昂贵，可用于HBVMs为临界值的病人的确证；可间接反映宿主HBV的复制水平，在评价抗病毒治疗的病毒学应答、疗效和判断预后方面有重要意义。 新增检测指标 Pre–S1、Pre–S2及其相应抗体 对乙肝两对半认识 * 2. HBV 血清标志物检测 * Pre–S1检测的临床价值 前S1蛋白主要存在于Dane颗粒和管型颗粒上，在HBV感染宿主细胞 过程及在病毒复制和刺激机体产生免疫反应中起重要作用; 前S1抗原与HBeAg之间有高度相关性，并可区别因变异种及其他原因造成的乙肝病毒e抗原(HBeAg)假阴性，可作为HBeAg假阴性补充，从而准确反映患者体内病毒复制情况； 可作为HBV感染及复制的标注，与其它血清标志物联合检测，相互补充。 Back 乙型肝炎的两对半 1.乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和表面抗体(HBsAb)， 2.e抗原(HBeAg)和e抗体(HBeAb)，3.核心抗原(HBcAg)和核心抗体(HBcAb)这三对 乙肝病毒的抗原和抗体。 由于HBcAg主要存在于受感染的肝细胞及乙肝病毒颗粒的核心内，一般血清中较难检测到，只有用特殊的方法处理后才能查到，所以通常只能检测到HBcAb，也就是说这第三对通常只能检测到半对，所以称之为两对半。两对半是乙肝病毒最常用的血清学标记。 乙肝五项的32种组合 * 大三阳 小三阳 * HBV DNA 定量检测 病毒复制水平最可靠，最直接的证据，与传染性和疾病进展密切相关； 主要用于HBV感染的判断，治疗适应症的选择及抗病毒疗效的判断。 HBV基因分型 基因分型的必要性； 基因分型的主要方法； HBV耐药突变的检测 3.HBV 分子生物学诊断 病毒基因突变 疾病进展 临床表现 对干扰素应答 耐药变异 生化学改善 HBeAg血清学转换 HBV DNA清除 急性乙型肝炎 慢性乙型肝炎 肝硬化 (LC) 肝细胞癌 (HCC) * HBV基因型/基因亚型 分型方法 优缺点 序列测定法 最直接，最可信，是HBV基因分型的金标准，但繁琐费时而且价格昂贵，混合型检测能力差，不适于大样本检测。 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法 (PCR-RFLP) 较测序法简便，适于大样本检测，但由于需要进行酶切，所以操作仍较为繁琐，成本较高，并存在酶切不彻底等问题。 pre-S2单克隆抗体酶联免疫测定 (mAbs EIA法) 简单、快速，已商品化，适于大样本检测，但检测费用较高并不能有效鉴别有些混合型感染和HBsAg低表达及某些表位表达不充分的标本。 分子探针杂交法 简单、快速，对混合型检测非常敏感，已商品化，适于大样本检测，但检测费用较高而且灵敏度和特异度还有待提高。 型特异性引物PCR法 简单、快速，成本低，具有较高的灵敏度，适于流行病学研究和临床大样本检测。但特异度还有待提高。 常用HBV基因分型方法比较 * 客观看待乙肝DNA 1.乙肝病毒DNA 定量往往被描述成为判断乙肝传染性大小、病情严重程度以及治疗效果的“金指标”，其实这些认识都是片面的。乙肝病毒DNA 定量检测为了解乙肝病毒在体内的变化增添了新的手段，弥补了以往乙肝病毒“两对半”检测的不足，只要抽血化验检测乙肝病毒DNA 呈阳性，无论其他乙肝病毒检测结果如何，都说明患者体内存在复制状态的乙肝病毒，血液具有一定传染性，这对于评估治疗效果和了解病情变化有一定帮助。但是目前乙肝病毒DNA 检测尚处于研究阶段，并非完美无缺 乙肝病毒DNA 定量不能说明病情轻重乙