规范《GB4801-1984-谷类籽粒赖氨酸测定法染料结合赖氮酸(DBL)法》.pdfVIP

中华人民共和国国家标准 UDC 口8.1:848 。862 谷类籽粒赖氨酸测定法 GB 4881一.4 染料结合赖氮酸 (DBL)法 Methodfordeterminationoflysineincerealgrains -Dy，一bindinglysinemethod 本标准适用于测定水稻、玉米、高粱、麦类等谷类籽粒的赖氨酸含量。 1 原理 在pH2左右缓冲体系中，样品蛋白质的碱性氨基酸 (赖氨酸、组氨酸、精氨酸)可与偶氮磺酸染 料酸性橙12等摩尔结合，生成不溶性络合物，其染料结合量 (摩尔数)相当于此三种碱性氨基酸的总 和。若另取一份样品，先用丙酸醉将蛋白质中赖氨酸的￡一氨基掩蔽 (丙酞化作用)，使之失去与染料 结合的能力，然后再与染料反应，所得染料结合垦只是组氨酸和精氨酸之和。根据两次染料结合量的 差值，便可算出该样品中的赖氨酸含量。 2 仪器、设备 2.1分析天平:感量0.4-9. 2.2 实验室用粉碎机。 2.8GXD一201型蛋白质分析仪或GXDL一202型蛋白质赖氨酸分析仪主机。 2.4实验室用电动往复振荡机。 2.5离心、机:300。一4ooor/min, 2.630一35ml具塞玻璃管或聚乙烯管。 2.7定量加液器或移液管:20.2、0.2-1. 2.8 容量瓶:1000.l00ml。 3 试剂 试剂除注明者外均为分析纯。 3.1草酸一乙酸一磷酸盐缓冲溶液:3.46磷酸二氢钾和209草酸(执C20,.2H20)分别溶于热水 后，全部转移到1000-1容量瓶中。再加人1.7-185%磷酸，60m]冰乙酸，1ml丙酸，冷却至室温，用 蒸馏水定容。 3.23.89-M酸性橙12(AcidOrange12，缩写成^O一12，分子式为C18Hll04N2SNa，生化试 剂，层析纯，含量不少于90%)染料溶液，准确称取1.3636酸性橙12(纯度按100%计)，溶解于热的 缓冲溶液后，再定量转移到1000-1容量瓶中，冷却至室温，用缓冲溶液定容。 3.3 16%和8% (W/V)乙酸钠溶液:称取16.09和8.09乙酸钠 (按无水乙酸钠计)，配成loom, 溶液。 3.4 丙酸醉:化学纯。 4标准曲线的绘制 配制1.20,1.30,1.40,1.50,1.60,1.70,1.80mM酸性橙12染料标准系列溶液，在GXD 国家标准局1984一12一20发布 1985一10一01实施 GB 4801一84 201型蛋白质分析仪上侧定透光率(为提高灵敏度，用连续档测定。即以40 -13.89 m M染料溶液加 25ml缓冲溶液，调透光率为。;40m1 3.89 MM染料溶液加125m1缓冲溶液，调透光率为87),然后以 透光率(%)为纵坐标，染料浓度(mm)为横坐标，在半对数座标纸上绘制标准曲线。或将透光率 换算为吸光度，计算回归方程。若用GXDL一202型蛋白质赖氨酸分析仪，则可直接读出吸光度，然 后以吸光度E为纵坐标，染料浓度(m M)为横坐标，在普通坐标纸上绘制标准曲线，或计算回归方 程。 5测定步骤 5.1试样的选取与制备 选取有代表性谷类籽粒，挑拣干净，按四分法缩减取样，取样量不得少于20g。将籽粒充分风干 或放在55-60℃烘箱中千燥六小时以上。带壳水稻、高粱，先脱壳，再用粉碎机粉碎，使90以上通 过0.25mm筛孔，充分混匀，装人磨口瓶中备用。 5.2 称样 参照表1称样量，和橄酞化和不酞化样品各两份，准确到0.4mB，分别放人30.35-1具塞玻璃管 内，标明为A管(酞化样品)和B管(不酞化样品)。与此同时，另稍样品，按GB 3523-83《谷类、 油料作物种子水分测定法》测定水分含量。