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维生素B1的测定 ——营养0901 徐燕萍 张晶荧 赵莎莎 赵小娟 维生素B1，又称硫胺。分子式C12H17ClN4OS。它是人体必需的13种维生素之一，是一种水溶性维生素，属于维生素B族，为无色结晶体，溶于水，在酸性溶液中很稳定，在碱性溶液中不稳定，易被氧化和受热破坏。 测定意义 由于人体不能自行合成维生素B1，必须从食物中摄取。因此，人体需依赖食物提供足够的维生素B1，测定各种食品维生素B1含量多少将对食品营养价值评价十分重要。如果由于食物摄入量不足，或因食物的加工、运输、储存、烹饪不当，使维生素B1受到破坏或损失，都会造成维生素B1的缺乏。因此，食品中的维生素B1测定对指导食品加工、保存、膳食营养配比等都有一定的意义。 维生素B1是人体能量代谢，特别是糖代谢所必需的，故人体对它的需要量通常与摄取的热量有关。当人体的能量主要来源于糖类时，维生素B1的需要量最大。 成人的建议每日摄取量是1．0～1．5mg。妊娠、哺乳期每天摄取1．5～1．6mg；在生病、生活紧张、接受手术时，要增加必要用量。 来源简介 维生素B1广泛存在于天然食物中，含量较丰富的有：动物内脏(肝、心及肾)、肉类、豆类、花生及精细加工的谷物类。谷物类是我国人民的主食，也是维生素B1的主要来源。但过分去除麸皮与糠，维生素B1损失很多，烹调加碱可使维生素B1损失增高。 维生素B1的测定方法： 分光光度法; HPLC法; 荧光分光光度法等。 分光光度法 分光光度法是将维生素B1生成游离型后，与重氮化试剂对氨基苯乙酮反应，生成紫红色色素，移至二甲苯中测定其浓度。 本法灵敏度差，只适用于食品中维生素B1含量高的试样。 高效液相色谱法 把维生素B1衍生化后导入高效液相色谱仪，经柱分离，通荧光检测器测定。 本法适用于体系复杂的样品，干扰严重时采用此法。 荧光法 这里我们主要介绍荧光法 参考GB/T 5009.84-2003 食品中硫胺素(维生素B1)的测定  方法原理 试样在酸性溶液中加热，提取维生素B1，经蛋白分解酶处理，使维生素B1成为游离型。再经层析柱纯化，去除荧光淬灭物质，同时浓缩，用碱性铁氰化钾溶液将其氧化成硫色素，在紫外线下，硫色素发出荧光，再给定的条件下以及没有其他物质干扰时，此荧光之强度与硫色素量成正比即与溶液中维生素B1量成正比。 操作步骤 1.样品处理 样品采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻保存，用时将其解冻后使用。 2.样品提取 3.净化 a.脱脂棉铺于盐基交换管的交换柱底部，再加约1g活性人造浮石使之达到交换柱的1/3高度。 b.用移液管加入提取液20~60ml。 c.加入约10ml热蒸馏水冲洗交换柱，弃去洗液，重复三次。 d.加入20ml50g/L酸性Kcl,收集此液于25ml刻度试管内。凉至室温，用250g/L酸性Kcl定容至25ml，即为净化液。 做空白试验 重复上述操作，将20ml维生素B1标准使用液加入盐基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。 4.氧化 将5ml试样净化液分别加入A、B两个反应瓶； 同时将5ml标准净化液分别加入A1、B1两个反应瓶中。 氧化流程 5、测定 荧光测定条件： 激发波长365nm；发射波长435nm；激发波狭缝5nm；发射波狭缝5nm。 依次测定下列荧光强度： a. 样品空白荧光强度（样品反应瓶A）； b. 标准空白荧光强度（标准反应瓶A1）； c. 样品荧光强度（样品反应瓶B）； d. 标准荧光强度（标准反应瓶B1）；  6.计算 式中：X──样品中硫胺素含量，mg/100g； U──样品荧光强度； Ub──样品空白荧光强度； S──标准荧光强度； Sb──标准空白荧光强度； c──硫胺素标准工作液浓度，μg/ml； V──用于净化的硫胺素标准工作液体积，ml； V1──样品水解后定容之体积，ml； V2──样品用于净化的提取液体积，ml； m──样品质量，g； 试剂作用 1、蛋白分解酶：用于试样的蛋白分解。 2、盐酸：水解样品。 3、氯化钾：该热溶液可从盐基交换管中的浮石里解析出维生素B1。 4、铁氰化钾碱性溶液：氧化游离的维生素B1，生成硫色素。 5、正丁醇：溶解紫外荧光物质——硫色素试剂。 注意事项  1 、加热酸性Kcl时不能使其沸腾，热Kcl滤速较快，而不沸则是使其不至因过饱和而在洗涤中结晶析出阻塞交换柱。 2、 紫外线